Análise da influência da microglia mutante na sobrevida do neurônio motor no modelo in vitro da Esclerose Lateral Amiotrófica utilizando camundongos transgênicos para SOD1 humana

• Processo: 08/10798-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2009
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Gerson Chadi
• Beneficiário: Tatiana Duobles
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Neurologia Microglia Degeneração neural Esclerose amiotrófica lateral Superóxido dismutase Cultura de células Modelos animais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: cultura de células | esclerose lateral amiotrófica | microglia | Neurodegeneração | Sod1 | Neurologia Experimental

Resumo

A Esclerose Lateral Amiotrófica (ELA) é uma doença progressiva caracterizada pela morte de neurônios motores e que leva rapidamente os pacientes à morte. Camundongos transgênicos que expressam a superóxido desmutase 1 (SOD1) mutante humana é o modelo experimental mais aceito para a doença. Os mecanismos que levam a perda neuronal ainda são pouco conhecidos e não existe um tratamento capaz de ao menos prolongar a vida do indivíduo. Estudos recentes indicam que as células gliais aceleram o processo neurodegenerativo, entretanto os mecanismos moleculares ainda não estão estabelecidos. A microglia é uma célula glial que merece uma atenção particular pelo fato de ser a célula imunocompetente do sistema nervoso central, além de sua ativação estar ligada a secreção de moléculas citotóxicas. Para investigar os possíveis efeitos da mutação da SOD1 na microglia e este efeito sob os neurônios motores, iremos avaliar a morte e o trofismo do neurônio motor espinal em sistemas de co-culturas neurônio/microglia e o efeito do meio condicionado destas células gliais sob os neurônios. Ambas as células serão extraídas da medula espinal do camundongo transgênico e não transgênico. A microglia será obtida dos animais neonatos e adultos na fase pré-clínica da doença. Células serão imunomarcadas com marcadores específicos e neurônios fluorescentes fotografados por contraste de fase, serão quantificados por métodos estereológicos específicos. O índice de morte neuronal será comparado à quantificação de marcadores de apoptose nas culturas de neurônios. A expressão gênica de moléculas candidatas produzidas pela microglia será quantificada pelo PCR em tempo real e a quantidade delas será também avaliada no meio condicionado das culturas destas células da neuroglia pelo ELISA sandwich. Assim, ao finalizarmos os experimentos, saberemos se a microglia exerce um efeito tóxico aos neurônios na ELA e teremos indicativos das moléculas responsáveis o que poderá servir de fundamentação para o estabelecimento de novas terapias para a doença. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

DUOBLES, Tatiana. Análise da influência da microglia mutante na sobrevida do neurônio motor no  modelo in vitro da esclerose lateral amiotrófica utilizando camundongos transgênicos para SOD1 humana. 2013. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina (FM/SBD) São Paulo.