Clonagem e expressao dos genes ctxb e itb em lactobacilus spp. com avaliacao da capacidade imunoestimulatoria em frangos de corte experimentalmente desafiados com salmonella enteritidis

• Processo: 09/52980-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2009
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Patologia Animal
• Pesquisador responsável: Raphael Lucio Andreatti Filho
• Beneficiário: Ana Angelita Sampaio Baptista
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Clonagem Salmonella enteritidis
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Clonagem | Gene Ctxb | Gene Itb | Iga Secretoria | Lactobacillus Spp | Salmonella Enteritidis

Resumo

O gênero Lactobacillus é um dos principais colonizadores do trato gastrintestinal das aves e desempenha funções imunológicas relevantes, tais como estimular à secreção de Imunoglobulina da classe A (IgA) intestinal. Recentemente, tem-se intensificado a sua aplicação, como veículo de vacina oral, em função das características de: sobrevivência às enzimas gástricas, colonização e aderência ao epitélio intestinal das aves e imunoestimulação. Existem informações na literatura que determinados genes, tais como ctxB e ltb da subunidade B da toxina colérica e enterotoxina termolábil de Escherichia coli, respectivamente, atuam como imunoestimulantes de mucosa. Por esses motivos, os objetivos do presente projeto são clonar e expressar os genes ctxB e Itb, em amostras de Lactobacillus spp. Visando verificar a ocorrência de aumento na capacidade imunoestimulatória das amostras recombinantes. Com esse propósito, amostras bacterianas do gênero Lactobacillus spp. Serão identificadas através de reação em cadeia da polimerase (PCR) e sequenciamento. Em seguida, serão testadas quanto à capacidade de adesão ao trato entérico das aves. As amostras que apresentarem melhores resultados quanto à adesão serão selecionadas e transformadas com os plasmídeos recombinantes, contendo os gene ctxB e ltb clonados nos vetores pIA5lacGFP e pIA5lac1 133PVA. Após a confirmação da transformação e expressão, as amostras de Lactobacillus recombinantes serão avaliadas em testes in vivo, com quantificação de IgA e IgG por testes de ELISA. E finalmente, os grupos tratados com Lactobacillus recombinante serão desafiados com Salmonela Enteritis. Ao término da investigação espera-se ter clonado e expresso os genes ctxB e ltb em Lactobacillus spp., obter informações sólidas sobre a capacidade imunoestimulatória dessas amostras recombinantes, bem como do papel de IgA secretória sobre o controle de infecções por Salmonela Enteritidis. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

BAPTISTA, A. A. S.; DONATO, T. C.; GARCIA, K. C. O. D.; GONCALVES, G. A. M.; COPPOLA, M. P.; OKAMOTO, A. S.; SEQUEIRA, J. L.; ANDREATTI FILHO, R. L.. Immune response of broiler chickens immunized orally with the recombinant proteins flagellin and the subunit B of cholera toxin associated with Lactobacillus spp.. POULTRY SCIENCE, v. 93, n. 1, p. 39-45, JAN 2014. (09/53570-3, 09/52980-3)

BAPTISTA, ANA ANGELITA S.; DONATO, TAIS C.; SOUZA, EDMARCIA E.; GONCALVES, GUILHERME A. M.; GARCIA, KEILA C. O. D.; RODRIGUES, JOAO C. Z.; SEQUEIRA, JULIO L.; ANDREATTI FILHO, RAPHAEL L.. Indução de resposta imune em frangos de corte imunizados com FliC recombinante e desafiados por Salmonella Typhimurium. Pesquisa Veterinária Brasileira, v. 33, n. 10, p. 1215-1221, OCT 2013. (09/52980-3, 09/53570-3)