Caracterização e avaliação imunológica de duas proteínas de membrana de Leptospira interrogans obtidas no hospedeiro Escherichia coli

• Processo: 10/12591-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2011
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento
• Beneficiário: Luis Guilherme Virgílio Fernandes
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Leptospirose Leptospira
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Leptospira | leptospirose | proteína recombinante | Biologia Molecular aplicada à Biotecnologia

Resumo

A leptospirose é uma zoonose de importância global recentemente incluída na lista das Doenças Tropicais Negligenciadas. Em áreas urbanas, os roedores desempenham o papel de principais reservatórios da doença por permitirem a colonização das leptospiras nos túbulos renais proximais e as excretarem vivas na urina. Segundo a Organização Mundial da Saúde, o número de casos clínicos anuais no mundo permanece subestimado em decorrência do amplo espectro de sintomas que o paciente pode apresentar além de um ineficiente diagnóstico rápido. Não há vacina eficaz até o momento. A identificação de proteínas da membrana externa conservadas entre cepas patogênicas são os principais alvos de pesquisa para elucidar os mecanismos de patogenicidade. São estas proteínas que, provavelmente, estão envolvidas na interação das leptospiras com o ambiente externo, podendo também servir de alvo para o sistema imune do hospedeiro. Dentre estas proteínas, a classe das lipoproteínas é uma das mais importantes, sendo de grande interesse para o desenvolvimento de novas vacinas e diagnóstico. Neste sentido, o projeto propõe a clonagem e expressão de duas novas lipoproteínas de superfície identificadas por bioinformática no genoma de Leptospira interrogans. Os genes que codificam estas proteínas, LIC10731 e LIC10645, serão amplificados a partir do DNA genômico e oligonucleotídeos complementares, e o inserto clonado em vetor de expressão de E. coli. As proteínas recombinante serão expressas com uma seqüência de seis resíduos de histidina (6XHis) na região N-terminal que permitirá a purificação dos recombinantes por cromatografia de afinidade a metal. Serão avaliados (i) atividade de imunogenicidade das proteínas em modelo animal e (ii) reatividade das proteínas recombinantes frente a soros hamsters infectados experimentalmente com leptospiras virulentas. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

FERNANDES, Luis Guilherme Virgílio. Caracterização e avaliação imunológica de três proteínas de superfície de Leptospira interrogans obtidas em Escherichia coli. 2013. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) São Paulo.