Avaliação do teste do cometa corado pelo Feulgen, prata e Sybr Gold

• Processo: 11/06310-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2011
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Anatomia Patológica e Patologia Clínica
• Pesquisador responsável: Hélio Amante Miot
• Beneficiário: Gabrielli Brianezi
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 09/08100-9 - Desenvolvimento de um método de análise digital para o teste do cometa corado pela prata, AP.R
• Assunto(s): Patologia Ensaio cometa Análise de imagens
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: análise de imagem | teste do cometa | Patologia

Resumo

O teste do cometa compõe uma bateria de teste de genotoxicidade utilizados para avaliação do risco. Baseia-se na migração do DNA nuclearsubmetido a uma corrente elétrica. É um método rápido, de baixo custo, fácil realização, alta sensibilidade. Detecta quebras na fita de DNA, é empregado a mais de 20 anos e seu uso está em crescimento.A versão alcalina do teste é mais sensível, pois detecta mais tipos de lesões ao DNA e adotada pela maioria dos laboratórios.Usualmente, o teste é corado por substâncias fluorescentes, que necessitam de microscópios especializados para sua análise, além deapresentarem risco biológico para os pesquisadores.Alternativamente, a coloração pela prata é de baixo custo, segura, porém, não é largamente utilizada, além de restarem resíduos de fundo quedificultam a leitura de sistemas de análise de imagem digital.Ambas as técnicas de coloração não possuem validação estequiométrica quanto à ligação do corante ao DNA e a intensidade de imagem.A coloração de Feulgen é utilizada para marcação nuclear em histologia, tem baixo custo, apresenta relação estequiométrica entre a intensidade de core a quantidade de DNA, dispensa microscópios de fluorescência e não causa pigmentação de fundo, podendo representar uma alternativa para coloração do teste do cometa.Os autores avaliarão 500 cometas de linfócitos humanos submetidos a diferentes concentrações de H2O2, corados pela prata, Feulgen e Sybr Gold,correlacionarão suas avaliações visuais (categorias), e os parâmetros de genotoxicidade. Serão estimadas as correlações intragrupo e intergrupo, além da análise da linearidade dose-resposta dos parâmetros.