Identificação de translocadores de fosfolipideos de Leishmania.

• Processo: 11/22172-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2012
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Lucile Maria Floeter-Winter
• Beneficiário: Carolina de Lima Jorge
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 10/52688-8 - Bioquímica, fisiologia e genômica funcional da relação Leishmania-macrófago, AP.TEM
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: escramblase | Flipase | Flopase | fosfatidilserina | bioquímica de protozoários

Resumo

No projeto Temático finalizado em 2010 (Processo 06/00019-0), iniciamos a busca por translocadores de membrana em L.(L.) amazonensis. Utilizando uma estratégia experimental que consiste na transfecção de parasitas selvagens com cosmídeos que constituem uma biblioteca do genoma do organismo, buscamos mutantes que apresentem a PS na membrana externa em fase de desenvolvimento que não deveria expor. As células nessas condições foram selecionadas em coluna de anexina ligada a "beads" magnéticos. Pela aplicação dessa estratégia foi obtido um cosmídeo cujo DNA foi utilizado em nova transfecção em promastigotas selvagens, e levou novamente a uma expressão de PS extemporânea. Análise in silico de seqüência parcial do DNA desse cosmídeo, comparado com as informações do banco de L. (L.) major, indicaram alguns candidatos a translocador, embora uma proteína típica, com domínios transmembrana, não esteja presente na lista. No entanto, esses resultados sugerem que a estratégia pode ser útil. Tendo em vista as informações acima, o presente projeto tem por*Buscar e elucidar os mecanismos utilizados pelos parasitas para a exposição de fosfatidilserina na face externa de sua membrana plasmática e determinar qual o papel dessa exposição na invasão do macrófago e na posterior inativação do macrófago. Objetivos específicos:1.Determinar quais os mecanismos utilizados por leishmânias na exposição de fosfatidilserina.2.Caracterizar as atividades de flipase e flopase de leishmânias quando em sua forma amastigota e verificar se os resultados descritos na literatura para promastigotas se aplicam ao modelo utilizado.3.Realizar a caracterização molecular das enzimas envolvidas nas atividades de flipase e flopase de fosfatidilserina em leishmânias.4.Obter mutantes que não exponham e que sempre exponham fosfatidilserina.