Cultivo e expansão de eritroblastos a partir de células mononucleares do sangue periférico para avaliar a eficiência da nucleoporação com plasmídeo contendo o gene GFP

• Processo: 12/06804-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2012
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Lygia da Veiga Pereira
• Beneficiário: Lucas Assis Pereira
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia molecular Genética médica Reprogramação celular Células-tronco pluripotentes Cultura de células Proteínas de fluorescência verde Fibroblastos MicroRNAs Biópsia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Células do sangue | Gfp | iPSC | Nucleoporação | Biologia Molecular

Resumo

Recentemente, pesquisadores utilizando fibroblastos murinos e humanos desenvolveram uma técnica para a reprogramação de células somáticas em células tronco pluripotente induzidas (iPSC), onde foram empregados 4 fatores para a reprogramação celular. Desde então, diversos estudos estão reproduzindo esta técnica de maneira efetiva em diferentes tipos celulares. A reprogramação pode ser feita de diversas formas, utilizando micro RNAs (miRNA), vetores epissomais (que podem ser facilmente perdidos após sucessivas mitoses), introdução de um pequeno DNA circular (mini-circulo) com os fatores de transcrição na célula, cultivo celular em meio de cultura com um determinado conjunto de proteínas específicas, entre outros. Porém, a obtenção de fibroblastos de pacientes para a geração de iPSC utiliza a biópsia da pele. Este é um método invasivo e com cultura celular de crescimento lento quando comparado à obtenção de células sanguíneas. Devido a este fato, muitos estudos se concentraram na reprogramação das células sanguíneas que são facilmente obtidas e possuem um crescimento mais acelerado do que os fibroblastos. Com isso, as células sanguíneas se tornaram uma fonte promissora para a reprogramação celular em iPSC para o desenvolvimento de modelos de doenças humanas. Neste trabalho, pretendemos realizar o cultivo e expansão de eritroblastos provenientes do sangue periférico (células mononucleares - MNC) e a nucleoporação utilizando um plasmídeo contendo o gene de GFP e posteriormente analisar a eficiência desta técnica.(AU)