Validação e avaliação da inibição de proteínas diferentemente expressas de plaquetas de pacientes com trombose venosa profunda

• Processo: 12/04040-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2012
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2016
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Joyce Maria Annichino-Bizzacchi
• Beneficiário: Mariane Cristina Flores Nascimento
• Instituição Sede: Centro de Hematologia e Hemoterapia (HEMOCENTRO). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Plaquetas sanguíneas Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR) Interferência de RNA Trombose venosa Inflamação Transporte de lipídeos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Inflamação | Plaquetas | RNAi | Rt-Pcr | transporte de lipídeos | trombose venosa profunda | Hematologia e Hemostasia

Resumo

A trombose venosa profunda (TVP) é uma doença multi-fatorial e está associada a uma alta morbi-mortalidade devido a complicações como a embolia pulmonar e a síndrome pós-trombótica, e cerca de 25% dos pacientes apresentam recorrência em 5 anos. A melhor compreensão da fisiopatologia da TVP torna-se interessante, podendo ter aplicabilidade na prática clínica. Previamente analisamos as proteínas de plaquetas por proteômica e identificamos cinco proteínas apenas em amostras de 3 pacientes com TVP crônica espontânea. Estas proteínas estavam ausentes nos 6 controles saudáveis incluídos: um irmão e em um vizinho para cada paciente. Estas proteínas foram a proteína ligante da apolipoproteína A1 (APOA1BP), a sub-unidade ¶1 do coatomer (COPZ1), a desidrogenase 11-17-² do estradiol (11-17ED), a hidrolase A-4 do leucotrieno (LA4H) e a desidrogenase do sorbitol (SORD). Nossa hipótese é que a APOA1BP seria uma proteína protetora, expressa em uma tentativa de minimizar os danos, e as outras quatro proteínas teriam uma ação deletéria, uma vez que desempenham um papel no transporte e metabolismo de lipídeos e na inflamação. A fim de validar estes dados, a análise por PCR-TR será realizada em RNA obtido de plaquetas de pacientes e controles com a amplificação dos genes-alvo usando valores de 2 (-DeltaDeltaCT) para normalização dos dados. Depois disso, a fim de explorar a influência in vivo da APOA1BP e COPZ1 na fisiopatologia da TVP, vetores lentivirais recombinantes específicos direcionados para a interferência RNA de Rattus norvegicus serão confeccionados e os melhores knock downs serão selecionados por PCR-TR. A influência da inibição destas proteínas sobre a TVP será avaliada pelo método de indução de trombose na veia cava em ratos utilizando FeCl3, avaliando-se o tamanho, peso e morfologia do trombo. O mesmo modelo será aplicado para avaliação da inibição da LA4H, 11-17ED e SORD pela bestatina, bis (hidroxifenil) azóis e fidarestat respectivamente, três potentes inibidores destas proteínas ou de seus precursores. Cada medicamento vai ser administrado a 6 animais por 7 dias antes da indução da TVP, que serão comparados com outros 6 animais infundidos com PBS.