Expressão em Escherichia coli, purificação, refolding e análise estrutural da proteína da capa protéica do rupestris stem pitting associated vírus

• Processo: 11/23680-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Data de Início da vigência: 02 de abril de 2012
• Data de Término da vigência: 01 de julho de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Raghuvir Krishnaswamy Arni
• Beneficiário: Ricardo Barros Mariutti
• Supervisor: Christian Betzel
• Instituição Sede: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Universität Hamburg (UHH), Alemanha
• Vinculado à bolsa: 10/19259-6 - Expressão em Escherichia coli, purificação, refolding e Análise Estrutural das proteínas do movimento e da capa proteica do Rupestris stem pitting associated virus, BP.DR
• Assunto(s): Escherichia coli
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: capa proteíca | Caracterização estrutural | Escherichia coli | purificação | refolding | Rupestris stem pitting associated virus | virologia

Resumo

A videira é a frutífera economicamente mais importante no mundo e é cultivada para que seus frutos produzam uvas de mesa, suco, e uvas passas. As bagas da videira são também a base para o alto valor agregado dos vinhos e outras bebidas alcoólicas. O Rupestris stem pitting associated virus - RSPaV foi identificado como o agente causador da doença do lenho estriado ou cascudo ("Rupestris stem pitting" - RSP), um dos componentes do complexo do lenho rugoso da videira ("Rugose wood" - RW). Esta doença é transmitida por enxertia e constitui uma das viroses de videira mais disseminadas no mundo, sendo descrita no Brasil no final dos anos 60. Devido à dificuldade de purificação das partículas virais a partir da videira infectada, a expressão em larga escala de proteínas virais em bactérias é uma estratégia promissora para o entendimento de suas propriedades. O presente trabalho tem como objetivo a produção, em estado nativo, da proteína da capa protéica (CP) de 28 kDa, codificada pelo RNA do Rupestris stem pitting associated virus. A partir da expressão em Escherichia coli, tendo como alvo a obtenção de proteínas em grandes quantidades (miligramas) com alto grau de pureza para ensaios de cristalização, a determinação de suas estruturas tridimensionais em alta resolução, poderão trazer contribuições a cerca dos mecanismos e modos de funcionamento uma vez que estudos de cristalização e análise por raios-X, que pudessem fornecer dados sobre a estrutura das partículas virais são escassos.Alguns resultados como expressão e purificação da proteína em condições nativa já foram obtidos. O dicroísmo circular mostrou que a proteína está estruturada e diversos ensaios de cristalização foram feitos. (AU)