Análise da imunomodulação pelo probiótico Lactobacillus rhamnosus sobre macrófagos estimulados com lipopolissacarídeo na produção de TNF-±, IL-1², IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 e óxido nítrico

• Processo: 12/24904-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Vigência (Início): 01 de março de 2013
• Vigência (Término): 28 de fevereiro de 2014
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Luciane Dias de Oliveira
• Beneficiário: Bruna Costa de França Marques
• Instituição Sede: Instituto de Ciência e Tecnologia (ICT). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José dos Campos. São José dos Campos , SP, Brasil
• Assunto(s): Resposta imune Anti-inflamatórios Probióticos Lipopolissacarídeos Citocinas Óxido nítrico Macrófagos Lactobacillus rhamnosus Técnicas imunoenzimáticas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: citocinas | Lipopolissacarídeo | Macrófago | Oxido Nitrico | probiótico | Microbiologia Aplicada

Resumo

Crescentes evidências justificam a utilização de micro-organimos probióticos em alimentos funcionais, produtos lácteos, ou outros suplementos alimentares destinados à manutenção e promoção da saúde humana, com uma renovação do interesse no uso de probióticos, os quais são capazes de modular a resposta imune de células sob estímulos antigênicos provenientes dos constituintes da parede celular de micro-organismos. Sabendo-se que lipopolissacarídeo (LPS) é um potente ativador celular e que os probióticos favorecem a atividade fagocítica inespecífica de macrófagos, bem como sua ativação e produção de citocinas pró e anti-inflamatórias, torna-se de grande importância avaliar seu papel imunomodulador em macrófagos ativados por LPS, uma vez que os efeitos imunomoduladores dos probióticos ainda não estão claramente definidos e a compreensão de seu mecanismo de ação na resposta imune possibilitará melhor indicação de seu uso terapêutico. Assim, a proposta deste estudo será avaliar o efeito imunomodulador do probiótico Lactobacillus rhamnosus ou seus produtos sobre macrófagos (RAW 264.7) ativados por LPS com relação à produção de citocinas pró e anti-inflamatórias (TNF-±, IL-1 ², IL-4, IL-6, IL-10, IL-12) e óxido nítrico. Será utilizada a cepa padrão de L. rhamnosus ATCC 7469, semeada em Ágar Man-Rogosa-Shape (MRS) e cultivada a 37ºC/5% CO2 por 24 h. Serão empregadas três diferentes preparações de probióticos: 1) Probiótico vivo (PV) na concentração de 5 x 107 células/mL padronizada em espectrofotômetro; 2) Probiótico morto (PM) obtido por autoclavagem da preparação anterior a 121°C/15 min; 3) Sobrenadante da suspensão do probiótico (SP) resultante da centrifugação da suspensão PM a 5000 rpm/10min. Serão utilizados macrófagos de camundongos (RAW 264.7), cultivados em meio DMEM completo (suplementado com 10% de soro fetal bovino). Para realização dos testes, estas células serão distribuídas em microplacas de poliestireno na concentração de 1 x 106 células viáveis/poço/mL de meio DMEM completo. Após 24 h de incubação (37°C/5% CO2) para adesão celular, as placas serão lavadas com PBS estéril e apirogênico e as células serão estimuladas com LPS de Escherichia coli na concentração de 1 µg/mL, recebendo, ao mesmo tempo, as diferentes preparações dos probióticos. As placas serão incubadas por 8 h (37°C/5% CO2). Os sobrenadantes das culturas serão coletados para a detecção e quantificação das citocinas (TNF-±, IL-1², IL-4, IL-6, IL-10 e IL-12) pelo método imunoenzimático (ELISA), e de óxido nítrico pelo método de Griess. Os resultados serão avaliados estatisticamente (ANOVA e teste de Tukey, 5%).(AU)