Avaliação dos efeitos citotóxicos, antiproliferativos e de morte celular programada da disintegrina ofídica jararagina em células tumorais de adenocarcinoma de mama humana

• Processo: 12/18256-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Pesquisador responsável: Durvanei Augusto Maria
• Beneficiário: Manuela Garcia Laveli da Silva
• Instituição Sede: Instituto Butantan. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia celular Morte celular Metaloproteinases Jararagina Toxinas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Adenocarcinoma de mama | Esferóides | jararagina | metaloproteinase | Toxinas | Biologia Celular

Resumo

A Jararagina é uma metaloprotease tipo disintegrina isolada do veneno de Bothrops jararaca, composta por domínios metaloproteinase, disintegrina (ECD) e rico em cisteína. Estudos in vitro têm mostrado que o tratamento com Jararagina diminui a viabilidade celular e apresentam efeitos inibitórios na adesão ao substrato de células tumorais, fibroblastos e endoteliais. A perda da adesão ocorre pela ligação ao domínio tipo-disintegrina da Jararagina as integrinas presentes na membrana da célula, impedindo a sinalização de proteínas da matriz extracelular e mediando vários fenômenos celulares com as células tumorais. Neste projeto serão avaliados os efeitos antitumorais in vitro da Jararagina em duas linhagens celulares de adenocarcinoma de mama, MCF-7 e MDA-MB-231 originárias da ATCC, tendo os respectivos códigos HTB-22TM e HTB-26TM. Os efeitos da Jararagina nas linhagens tumorais serão avaliados pela viabilidade celular pelo teste colorimétrico MTT e a detecção da IC50%, pela formação de radicais livres lipoperoxidados, das alterações nas vias de morte celular por apoptose e necrose e pela implantação do sistema de cultura 3D (Matrigel). A toxicidade da Jararagina será analisada por citometria de fluxo e as alterações intraestruturais por microscopia eletrônica de varredura e confocal a laser. Marcações dos lisossomas por microscopia de fluorescência utilizando acridine-orange e o potencial elétrico mitocondrial por sonda rodamina-123 e o arranjo do citoesqueleto pela faloidina utilizando microscopia confocal a laser. Os valores dos resultados expressos em média ± dp e as diferentes estatísticas serão avaliados pelo programa Prism Versão 5.0, sendo considerados valores com p< 0.05.