Gene targeting em células-tronco embrionárias murinas para geração de linhagem de camundongo nocaute para Ki-1/57

• Processo: 13/04492-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2013
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Ângela Saito
• Supervisor: Richard Robert Behringer
• Instituição Sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of Texas MD Anderson Cancer Center (MD Anderson), Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 10/15760-2 - Caracterização funcional da proteína humana reguladora Ki-1/57: estudos celulares e em modelo in vivo, BP.DD
• Assunto(s): Marcação de genes Recombinação homóloga Células-tronco embrionárias
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: células-tronco embrionárias | Gene Targeting | nocaute | Recombinação Homóloga | Geração de camundongos nocaute por recombinação homóloga em células-tronco embrionárias

Resumo

Ki-1/57 é uma proteína regulatória, intrinsecamente não estruturada, localizada no núcleo e no citoplasma. Ela é codificada pelo gene Habp4, localizado no cromossomo 13 em camundongos. Diversas modificações pós-traducionais regulam a função de Ki-1/57, como fosforilação por PKC, metilação por PRMT1 e sumoilação. Ensaios de duplo-híbrido em levedura e imunoprecipitação com extrato de células de mamíferos mostraram que ela interage com diversas proteínas regulatórias como RACK1, p53, CHD3, SFRS9, hnRNPQ, CIRP, RPL38 e FXR1. Ela está envolvida em eventos do splicing de pre-mRNA e regulação da maquinaria traducional. Devido ao seu papel pleiotrópico, é muito interessante investigar o papel biológico de Ki-1/57 em modelo animal através de nocaute gênico em camundongo. O objetivo deste Projeto é realizar no laboratório do Dr. Richard Behringer.da University of Texas M. D. Anderson Cancer Center toda a etapa de gene targeting para interromper o gene Habp4 em células-tronco embrionárias de camundongo. O vetor alvo foi desenhado e construído pela bolsista e será utilizado para substituir, através de recombinação homóloga, os 5 primeiros exons do gene pelo cassete contendo LacZ-neo-LoxP. Os clones recombinantes serão selecionados, congelados, o DNA genômico extraído para a confirmação por Southern Blot. A bolsista terá uma ótima oportunidade de aprender os detalhes das técnicas com especialistas da área para realizar esta etapa do Projeto de doutorado direto mais rapidamente do que se fosse realizado no Brasil. (AU)