| Processo: | 14/00661-0 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado |
| Data de Início da vigência: | 11 de agosto de 2014 |
| Data de Término da vigência: | 20 de julho de 2015 |
| Área de conhecimento: | Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular |
| Pesquisador responsável: | Vitor Marcelo Silveira Bueno Brandão de Oliveira |
| Beneficiário: | Marcelo Ferreira Marcondes Machado |
| Supervisor: | Jaap Broos |
| Instituição Sede: | Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil |
| Instituição Anfitriã: | University of Groningen, Holanda |
| Vinculado à bolsa: | 11/20941-9 - Desenvolvimento e utilização de técnicas de fluorescência para o estudo de alterações conformacionais em proteínas, BP.PD |
| Assunto(s): | Enzimologia |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | aminoácidos não naturais | hetero-FRET | homo-FRET | mutações pontuais | p nitro fenilalanina | Enzimologia |
Resumo O principal objetivo do presente projeto é o desenvolvimento e aplicação de técnicas utilizando ensaios de fluorescência visando o estudo de alterações conformacionais em proteínas, mais especificamente em enzimas proteoliticas. Pretendemos usar como primeiro alvo a timet oligopeptidase (TOP, EC 3.4.24.15), sendo que esta enzima pode sofrer alterações conformacionais devido à interação com substratos ou inibidores. A estrutura dessa peptidase apresenta dois domínios compostos praticamente por estruturas alfa-hélice, sendo que, entre estes dois domínios forma-se um "profundo canal" onde o sítio ativo fica localizado, e que pode se fechar ao redor do substrato durante a catálise. TOP mutantes serão preparadas com a introdução por mutação sítio dirigida de um par de sondas, ficando uma de cada lado do canal central presente na estrutura da TOP. Tais sondas poderão ser: resíduos de triptofano (doadores de fluorescência) ou resíduos de aminoácidos não naturais (doadores ou aceptores de fluorescência), e o desenvolvimento da metodologia para a introdução de tais resíduos de aminoácidos não naturais em posições específicas nessas proteínas, é na verdade, por si um dos grandes objetivos do presente projeto. Subseqüentes experimentos de fluorescência no estado estacionário e fluorescência resolvida no tempo serão então realizados na presença de diferentes substratos e inibidores desta peptidase, para se analisar o movimento de "fechamento" do canal ao redor do ligante no centro ativo. | |
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