Expressão, purificação, ensaio de atividade e de cristalização das enzimas UCK1 e UCK2 da via de salvação de pirimidinas do parasita Schistosoma mansoni

• Processo: 14/23659-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2015
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2017
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Humberto D'Muniz Pereira
• Beneficiário: Gabriela Viotto Sarro
• Instituição Sede: Instituto de Física de São Carlos (IFSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Cristalografia de proteínas Doenças negligenciadas Cinética enzimática Inibidores Schistosoma mansoni Pirimidinas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cinética Enzimática | Cristalografia de Proteínas | Schistosoma mansoni | uridina citidina kinase | Cristalografia de Proteínas

Resumo

As doenças tropicais negligenciadas são consideradas um grande problema de saúde pública, estando principalmente relacionadas com a pobreza e o baixo desenvolvimento econômico. Essas doenças negligenciadas são responsáveis por uma das maiores causas de morte em países em desenvolvimento, recebendo pouca ou nenhuma atenção das indústrias farmacêuticas para o desenvolvimento de terapias. Schistosoma mansoni é o parasita responsável pela esquistossomose mansônica. O Schistosoma, assim como todo ser vivo, necessita da contribuição de bases de DNA para seu metabolismo e requer um ativo metabolismo de nucleotídeos. Ao contrário do metabolismo de purinas, que possui apenas a via de salvação para suprir a demanda de bases purínicas, sendo essa bem relatada na literatura, o metabolismo de pirimidinas possui tanto a via "de novo" como a via de salvação de pirimidinas e escassa literatura para essas vias. Assim, os objetivos deste projeto são: expressar, purificar, realizar ensaios de atividade e de cristalização de uma das enzimas envolvidas no metabolismo de nucleotídeos de S. mansoni, uridina citidina quinase 1 e 2 (UCK1 e UCK2). O gene codificante para a enzima foi clonado em sistema high-throughput juntamente com outras enzimas e testes de expressão e purificação em larga escala foram realizados. O entendimento da estrutura desta enzima juntamente com sua atividade colabora para o entendimento bioquímico do parasita e posteriormente a identificação de enzimas chaves desta via para o desenvolvimento de inibidores específicos.