Clonagem, expressão e purificação de uma aspartil protease (Rm27441) presente em intestino de carrapato Rhipicephalus microplus

• Processo: 14/22464-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2015
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Aparecida Sadae Tanaka
• Beneficiário: Leticia Dantas Silva
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 12/03657-8 - Inibidores e proteases de ectoparasitas: relação de estrutura-função e identificação do papel dessas moléculas na interação de vetores de doenças e seus agentes etiológicos, AP.TEM
• Assunto(s): Clonagem Proteínas Intestinos Carrapatos Rhipicephalus Caracterização molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: carrapato | digestão proteína | enzima proteolítica | intestino | Proteína

Resumo

O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus é o principal ectoparasita de bovinos nos países de regiões tropicais e subtropicais. Este carrapato é o vetor de Anaplasma sp e Babesia sp ao bovino o que aumenta os prejuízos na agropecuária, por meio da diminuição na produção de leite, carne e na depreciação do couro. Atualmente, a principal forma de controle deste ectoparasita são os acaricidas, os quais quando empregado de forma incorreta ou excessiva promovem a seleção de linhagens de carrapatos resistentes e ainda a contaminação do ambiente e dos derivados bovinos, tornando necessária a busca de métodos alternativos para o controle deste parasita. Nos últimos anos houve um esforço mundial na tentativa de desenvolver uma vacina para o controle de R. microplus que resultaram em dois produtos comercialmente disponíveis, a GAVAC e a TickGARD Plus, desenvolvidas em Cuba e na Austrália. Entretanto, nenhuma das vacinas apresentaram uma taxa de proteção elevada nos rebanhos brasileiros. Com o objetivo de contribuir para a identificação e caracterização de moléculas importantes na fisiológica do carrapato R. microplus com potencial antigênico, nosso grupo obteve o transcriptoma de intestino de fêmeas ingurgitadas de R. microplus, dentre os transcritos de interesse, foi identificado uma aspartil protease, a qual foi selecionada para este estudo. Análise inicial de expressão do transcrito da aspartil protease (Rm27441) revelou sua presença nos diferentes tecidos do carrapato, entretanto, sua presença foi marcante em corpo gorduroso e no intestino, tecidos tipicamente relacionados com a degradação de vitelina e do sangue ingerido pelo ectoparasita, respectivamente. Desta forma os objetivos deste trabalho são: a clonagem, expressão e purificação de uma nova aspartil protease do carrapato R. microplus. De posse da proteína recombinante será possível estudar o seu potencial no desenvolvimento de uma vacina.