Caracterização estrutural do mecanismo de transporte para o núcleo celular de proteínas relacionadas ao metabolismo de glicogênio em Neurospora crassa

• Processo: 15/13814-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2015
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Marcos Roberto de Mattos Fontes
• Beneficiário: Andréa Coelho de Barros
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/24705-3 - O fungo filamentoso Neurospora crassa como um organismo modelo para a caracterização funcional de proteínas/fatores de transcrição que regulam o metabolismo de carboidratos, AP.TEM
• Assunto(s): Glicogênio Proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: transporte nuclear | Biologia molecular estrutural

Resumo

Dentre as vias de transporte conhecidas que viabilizam o transporte de macromoléculas para dentro ou fora do núcleo através do reconhecimento de sequências de sinalização específicas, a chamada Via Clássica de Importação Nuclear é a mais bem caracterizada. Nesse processo, o estudo estrutural da Importina-± (Imp±) é uma peça chave para o seu entendimento. Assim, esta proteína foi recentemente cristalizada e teve sua estrutura elucidada pelo nosso grupo de pesquisa. Experimentos biofísicos também já foram realizados por nós e mostraram que a proteína conserva algumas características presentes nas isoformas de Mus musculus e Saccharomyces cerevisiae que já tiveram suas estruturas cristalográficas elucidadas. Porém, a NcImp± apresenta aminoácidos não conservados próximos a região do domínio IBB, o que pode estar relacionado com a especificidade da proteína. Então, estamos propondo neste projeto: a) cristalizar e elucidar a estrutura da NcImp± com peptídeos da região ligadora de proteína (região NLS) envolvidas na regulação do metabolismo de glicogênio; b) quantificar a interação dos peptídeos NLS com a NcImp± por experimentos utilizando técnicas de calorimétricas; c) expressar, purificar e caracterizar preliminarmente proteínas envolvidas na regulação do metabolismo de glicogênio da N. crassa.