Estudos estruturais com a importina-± e seqüências de localização nuclear (NLS) de proteínas envolvidas no metabolismo de glicogênio do fungo Neurospora crassa

• Processo: 10/03486-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Marcos Roberto de Mattos Fontes
• Beneficiário: Marília Lisboa de Oliveira
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 08/57566-8 - O fungo filamentoso Neurospora crassa como um organismo modelo para a identificação e caracterização de novas proteínas/fatores de transcrição regulando o metabolismo de glicogênio, AP.TEM
• Assunto(s): Cristalização Cristalografia de proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cristalização | Importina | Sequência de Localização Nuclear | Cristalografia de proteínas

Resumo

Proteínas que contém as clássicas seqüências de localização nuclear (NLSs) são importadas para o núcleo pelo heterodímero importina-alfa/beta. A importina-alfa (ImpA) contém o sítio de ligação do NLS, enquanto a importina-alfa media o transporte através do poro da membrana nuclear. Para determinar as bases estruturais do reconhecimento de seqüências NLS pela importina-± de mamíferos, o laboratório de Biologia Molecular Estrutural do Departamento de Física e Biofísica do Instituto de Biociências - UNESP, em colaboração com pesquisadores da Universidade de Queensland - Austrália, vem se dedicando a esta linha de pesquisa desde 1999. Nestes últimos dez anos já foram elucidadas cerca de uma dezena de estruturas por técnicas de cristalografia, e com auxílio de outras técnicas (surface plasmon ressonance (Biacore), equilíbrio de sedimentação, eletroforese e dicroísmo circular). A combinação destes dados experimentais gerou informações de grande importância para o entendimento do processo de importação de proteínas para o núcleo celular com possíveis implicações no desenho racional de drogas e no processo de drug delivery. Neste período foram publicados artigos em periódicos de grande índice de impacto (Journal Biological Chemistry, Journal Molecular Biology e Nature Structural Biology - artigo precursor publicado pelo nosso colaborador em 1999). O projeto proposto aqui trata especificamente do estudo do complexo estrutural de complexos de ImpA com peptídeos NLSs de proteínas envolvidas no metabolismo de glicogênio do fungo Neurospora crassa utilizando técnicas de cristalografia e outras técnicas biofísicas e bioquímicas. O projeto está diretamente associado com um projeto temático vigente na FAPESP sob coordenação da Profa. Maria Célia Bertolini no qual o Prof. Fontes é pesquisador principal e responsável pela área estrutural. Neste projeto temático, o objetivo do grupo coordenado pelo Prof. Fontes é, com o emprego de técnicas de biologia estrutural, tentar atribuir funções biológicas às proteínas identificadas e anotadas como proteínas hipotéticas ou predicted. Neste contexto, a proteína ImpA, já expressa e purificada regularmente em nosso laboratório, servirá de modelo para testar a função das proteínas hipotéticas como entidade a ser transportada para o núcleo celular. A aluna selecionada para atuar neste projeto está cursando o terceiro ano do curso de Física Médica e já vem estagiando com sucesso em nosso laboratório há alguns meses mostrando aptidão para a atuação na área de pesquisa, trabalhando com destreza, profissionalismo e eficiência.