Papel fisiológico das microvesículas derivadas de macrófagos M2 na doença renal crônica e aguda

• Processo: 16/25613-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2017
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2019
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Alvaro Pacheco e Silva Filho
• Beneficiário: Juan Sebastian Henao Agudelo
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Nefrologia Nefropatias Macrófagos Inflamação Modelos animais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: doença renal | Imunidade innata | Inflamação | Macrófagos | microvesiculas | renoproteção | Nefrologia

Resumo

A renoproteção devida à ação de Mxs M2 é principalmente mediada por fatores parácrinos. Adicionalmente, recentemente foi demonstrado que Mxs de forma semelhante a outras células eucarióticas pode libertar microvesículas (MVs). as MVs são definidas como vesículas contendo fragmentos de membrana com tamanhos determinados entre 100-1000 nm e capacidade para transportar moléculas bioactivas. No caso de Mxs, foi demonstrado que Mxs-M2 pode secretar MVs com material genético associado à polarização M2. Na verdade, o efeito fisiológico de MVs-M2 não foi verificado sobre a doença renal, bem como sobre a polarização macrófagos. Nesse contexto, objetivou-se avaliar o papel imunorregulador do MVs-M2 nos Mxs pro-inflamatórios e verificar seu papel na doença renal aguda. Métodos: O meio condicionado de Mxs-M2 livre de recombinante foi ultracentrifugado em 100.000g para extração de MVs. Em seguida, Mxs derivados da medula osssea foram tratados com doses de 9.45 * 109 MVs-M2 (8h em 48h) e subsequentemente os Mxs Foram ativados por LPS / IFN-g Em 24 horas. Complementarmente, o efeito de MVs-M2 foi avaliado por glomerulosclerose segmentar focal (GESF) induzida por Adriamicina em camundongos machos C57BL6. Resultados: Inicialmente, verificamos e determinamos a capacidade de Mxs-M2 de produzir microvesículas. A análise de NanoSight mostrou que as vesículas Mxs-M2 têm um tamanho médio de 144,8 nm e uma concentração de 9,45 * 1010 partículas / ml. Além disso, os MVs exibiram elevada expressão de Anexina e CD9 baixo, em conjunto estes dados confirmam que estas vesículas seriam principalmente uma população enriquecida com microvesículas. Por outro lado, verificamos que MVs-M2, apresentado em sua membrana, antígenos constitutivos de Mxs como CD11b, LyC6 e F4/80. Além disso, quando comparado com MVs-M2 com MVs-M0, encontramos que MVs-M2 tinha alta expressão de CD206. Estes dados mostraram que MVs-M2 expressou antígenos associados com a polarização M2. Finalmente, Mxs foram tratados com MVs-M2 e subsequentemente ativados com LPS / IFN-g. Verificou-se que o Mxs-M1 exposto a MVs-M2 reduziu o antígeno co-estimulador CD86 e aumentou o receptor de manose. Complementarmente, analises intracelular revelou que MVs-M2 inibe a secreção de IL-6 e manteve a produção estável de IL-10 em Mxs-M1. Finalmente, investigamos o caráter anti-inflamatório do MVs-M2 em um modelo pré-clínico de glomerulosclerose segmentar focal. Os camundongos tratados com MVs-M2 foram protegidos contra perda de peso e proteinúria; Também os genes podócitos comumente afetados pelo GESF foram mais expressos com o tratamento quando comparado com o grupo no tratado. Conclusões: Esses resultados iniciais sugerem que as MVs-M2 possui propriedades imunorreguladoras em Mxs-M1 e promovem a renoproteção em GESF. (AU)