Emprego de fusões com GFP para análise dos mecanismos envolvidos na agregação da proteína humana VAPB expressa em Saccharomyces cerevisiae

• Processo: 17/04094-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 12 de junho de 2017
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2017
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Luis Eduardo Soares Netto
• Beneficiário: Eduardo Tassoni Tsuchida
• Supervisor: Judith Frydman
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Stanford University, Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 14/24541-3 - Emprego de fusões com GFP para análise dos mecanismos da toxicidade da proteína humana VAPB expressa em Saccharomyces cerevisiae, BP.IC
• Assunto(s): Proteínas Esclerose amiotrófica lateral Proteostase Saccharomyces cerevisiae
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: agregação protéica | degradação proteica | esclerose lateral amiotrófica | Proteostase | Saccharomyces cerevisiae | Vapb | Bases moleculares de doenças genéticas

Resumo

A proteína VAPB é uma proteína transmembrana localizada no retículo endoplasmático (RE), devido a presença de um domínio transmembrana (TMD) em sua região C-terminal, além de um domínio MSP (Major Sperm Protein) na porção N-terminal. A mutação que resulta na troca de uma prolina por serina na posição 56 (P56S) no domínio MSP da proteína VAPB está relacionada com o desenvolvimento de Esclerose Lateral Amiotrófica tipo 8 (ELAF8). A ELA é uma doença neurodegenerativa que afeta seletivamente neurônios motores, sendo 10 por cento dos casos familiais. A mutação P56S impede a clivagem e secreção do domínio MSP e sua interação com receptores de efrina (EphR), além de tornar a proteína resistente a solubilização em detergentes não-iônicos e levar a formação de agregados proteicos que sequestram a proteína selvagem em um efeito dominante negativo. A agregação é uma característica fisiológica e inicial do mecanismo de controle de qualidade de proteínas (PQC) associado com a manutenção na proteostase celular. Algumas chaperonas estão envolvidas na formação de agregados proteicos e sua destinação para vias de degradação, como as small heat shock proteins (hHSP), sendo a Hsp42 essencial para a formação de Q-bodies, enquanto a Hsp104, para o IPOD. Deste modo, esse projeto tem como objetivo entender os mecanismos moleculares envolvidos na formação, localização e degradação de agregados proteicos de VAPB fusionada a GFP (GFP-VAPB) por análise em microscopia de fluorescência e confocal. (AU)