Detecção de anticorpos específicos contra T. gondii em amostras com concentrações variadas de IgG por ensaio de captura de IgG em proteína a e reação com antígeno de alta sensibilidade

• Processo: 17/14687-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2017
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2018
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Heitor Franco de Andrade Junior
• Beneficiário: Aline Bastos Dias do Passos
• Instituição Sede: Instituto de Medicina Tropical de São Paulo (IMT). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Toxoplasma gondii Proteína A Toxoplasmose Imunoglobulina G Ensaio de imunoadsorção enzimática Anticorpos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: determinação | Elisa | IgG | modelos experimentais | proteína A | toxoplasmose | Vacinas de protozoários

Resumo

Reações de detecção de anticorpos utilizando antígeno adsorvido em fase sólida dependem de diluição adequada da amostra biológica, como soros. Algumas amostragens não permitem esta diluição precisa, como coletas em papel filtro ou sobrenadantes de purificações celulares, resultando em menor sensibilidade e especificidade. Isto é um problema em modelos experimentais, onde o pequeno volume de sangue de animais experimentais obriga seu sacrifício e inviabiliza coletas múltiplas. A adsorção à fase sólida de quantidade fixa de ligante de anticorpos permitiria a uniformização da quantidade de IgG capturada, sem interferência da sua origem, desde que houvesse vasto excesso de anticorpos ou alta sensibilidade do ensaio. O uso de ligantes específicos de IgG usados para purificação por afinidade, como a proteína A de Staphylococcus aureus (SPa) ou proteína G de Streptococcus sp., podem ser uma ferramenta útil para um reconhecimento antigênico mais preciso em ensaios em fase sólida. A SPa se liga a duas moléculas de IgG pela sua porção Fc liberando quatro sítios Fab de reconhecimento antigênico, que poderiam reagir com antígenos marcados. Esta determinação permitiria comparar precisamente amostras pequenas de material de volume desconhecido, obtidos de modelos experimentais desta infecção ou de suas vacinas, sem envolver a necessária morte do animal experimental para coleta do soro e permitindo uma comparação adequada. Neste projeto pretendemos padronizar a detecção quantitativa de anticorpos específicos anti-T. gondii utilizando ensaios de captura de IgG em proteína A adsorvida na fase sólida, para fixar a massa de IgG total e quantificação relativa dos anticorpos específicos por reação com antígeno de T. gondii conjugados a marcadores de alta sensibilidade, como o sistema avidina-biotina, em modelos experimentais de vacinação para toxoplasmose. (AU)