Efeito do tratamento precoce com insulina e o papel da Grb2 e sinalização downstream sobre a função da célula beta pancreática: possível ação protetora sobre o estresse de retículo endoplasmático

• Processo: 18/19979-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia de Órgãos e Sistemas
• Pesquisador responsável: Helena Cristina de Lima Barbosa
• Beneficiário: Marina dos Santos Carvalho
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Fisiologia endócrina Diabetes mellitus tipo 2 Insulina Células secretoras de insulina Estresse do retículo endoplasmático Ensaio clínico
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: célula beta pancreática | estresse de reticulo endoplasmatico | Insulina | Tratamento precoce com insulina | Fisiologia Endócrina

Resumo

O tratamento precoce com insulina é uma alternativa de terapia para pacientes recém diagnosticados com diabetes mellitus tipo 2 que tem sido testada em diversos ensaios clínicos. Pacientes que passam pelo tratamento atingem rapidamente a normoglicemia e apresentam um bom controle glicêmico a longo prazo. Esta melhora no quadro de DM2 possivelmente decorre da recuperação e manutenção da função da célula beta pancreática, célula que durante o desenvolvimento do DM2 pode ter redução de massa e da sua capacidade secretora de insulina. Por se tratarem de ensaios clínicos, não se sabe ao certo quais são os mecanismos ativados na célula beta, pelo tratamento precoce com insulina para que haja esta melhora. Nossa hipótese é de que, pelo menos em parte, esta melhora se deva à reversão do quadro danoso do estresse de retículo endoplasmático (RE), um dos mecanismos relacionados a este declínio da função insular. A perda da homeostase durante o estresse de RE ativa a UPR, unfolded protein response, que pode comprometer a secreção de insulina e levar à apoptose. No presente projeto propomos avaliar o papel da Grb2 e da FAK como possíveis mediadoras da sinalização de insulina. A proteína adaptadora Grb2 tem se mostrado importante nas vias de sinalização de crescimento, proliferação e sobrevivência celular. Enquanto sua parceira molecular FAK tem importante papel sobre mecanismos relacionados à sobrevivência, migração e crescimento celular. Para avaliar tal hipótese, células beta INS-1E serão tratadas com CPA para indução ao estado de estresse de RE e, posteriormente, tratadas com insulina. Em seguida, os componentes da UPR serão avaliados, por Western Blotting e qPCR. Para avaliar a possível participação da via Grb2-FAK, Grb2 terá sua expressão reduzida com uso de siRNAs específicos, e em seguida as mesmas analises dos componentes da UPR serão feitas. Além disso, no modelo de INS-1E tratado com siRNAs contra a Grb2, a fosforilação em dois sítios da FAK serão avaliados através de Western Blotting. Desta forma, este projeto contribuirá com a elucidação de mecanismos de atuação de tratamento em uso em pacientes, com o objetivo de torna-lo mais eficaz.