Identificação e avaliação de fatores de virulência do fungo Histoplasma capsulatum envolvidos na formação de biofilmes para identificação de novos alvos terapêuticos

• Processo: 19/04882-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2020
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Farmácia
• Acordo de Cooperação: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
• Pesquisador responsável: Ana Marisa Fusco Almeida
• Beneficiário: Nathália Ferreira Fregonezi
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Assunto(s): Fatores de virulência Biofilmes
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biofilme | Fatores de virulência | Histoplasma capsulatum | Micologia, microbiologia

Resumo

Histoplasma capsulatum é o fungo dimórfico causador da histoplasmose, micose respiratória e sistêmica, que acomete inclusive indivíduos imunocompetentes. Diversas estratégias, tais como sua permanência intracelular, termodimorfismo, expressão de adesinas, e, mais recentemente, a formação de biofilmes, já foram descritas na literatura como importantes para o processo de permanência e multiplicação nas diversas condições impostas pelo hospedeiro. Dessa maneira, o presente estudo pretende verificar a cinética de expressão de genes de fatores de virulência do fungo Histoplasma capsulatum na sua forma planctônica e durante a formação de biofilmes em superfície abiótica, bem como a importância dos mesmos no processo de adesão e formação dos biofilmes. Propõe-se também investigar a importância do biofilme na virulência recuperando-se leveduras dessa condição e avaliando a capacidade de infecção em modelos in vivo e in vitro. A cinética de expressão dos genes referentes aos fatores de virulência GAPDH, Enolase, Hsp60, CBP1, alfa-1,3 glucana e Yps3 será avaliada através de PCR em tempo real (q-PCR). Para identificar o impacto desses fatores de virulência na formação do biofilme, os biofilmes serão feitos na presença e ausência de anticorpos policlonais referentes aos fatores de virulência, bloqueando-os, e assim serão analisados quanto a atividade metabólica, produção de matriz extracelular e biomassa total, além de análises físicas através de microscopia eletrônica de varredura. A taxa de infecção in vitro em pneumócitos (A549) e macrófagos (RAW 264.7) será analisada por citometria de fluxo, e a virulência e capacidade de infecção das leveduras planctônicas e provenientes de biofilme serão avaliadas no modelo alternativo Galleria mellonella, através do estabelecimento de curva de sobrevivência e carga fúngica. Espera-se que os resultados obtidos esclareçam o papel dos diversos fatores de virulencia do fungo na adesão e consolidação de biofilmes de H. capsulatum, visando encontrar possíveis alvos terapêuticos relacionados com essa condição, bem como elucidar se a virulência do fungo é exacerbada quando encontra-se em condição de biofilme.

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

FREGONEZI, Nathália Ferreira. Fatores de virulência do fungo Histoplasma capsulatum envolvidos na formação de biofilmes. 2020. Dissertação de Mestrado - Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Araraquara Araraquara.