O papel das proteínas SOCS e STATs na diferenciação das células TCD4+ naive em modelo experimental de sobreposição de Asma e Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica

• Processo: 21/02477-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2021
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2022
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia de Órgãos e Sistemas
• Pesquisador responsável: Fernanda Degobbi Tenorio Quirino dos Santos Lopes
• Beneficiário: Juliana Dias Lourenço
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 18/02537-5 - Caracterização da síndrome de sobreposição asma-DPOC (ACOS): estudos experimentais e clínicos, AP.TEM
• Assunto(s): Imunologia celular Asma Doença pulmonar obstrutiva crônica Imunidade adaptativa Proteínas supressoras da sinalização de citocina Fatores de transcrição Linfócitos T CD4-positivos Células Th17 Células Th2 Modelos animais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Células TCD4 | Dpoc | imunidade adaptativa | SOCs | Stat | Tabagismo | Imunologia celular

Resumo

Apesar de a Asma e a Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica serem descritas como entidades clínicas distintas, mais recentemente tem se intensificado as discussões sobre quando a DPOC e a asma são expressões de uma mesma doença que acomete as vias respiratórias (1). A utilização de modelos animais auxilia em um maior entendimento dos mecanismos fisiopatológicos envolvidos no desenvolvimento de diferentes doenças, entre elas a Asma e DPOC. Até o momento, poucos estudos têm descrito a utilização de animais para simular a sobreposição de Asma e DPOC, bem como o papel da imunidade adaptativa neste processo. Geralmente, pacientes asmáticos apresentam um perfil de resposta Th2, com aumento de células TCD4+ e aumento de eosinófilos ao redor das vias aéreas, enquanto que pacientes DPOC apresentam um perfil de resposta imunológica Th1, aumento de células TCD8+ e aumento de neutrófilos (3; 4). Nosso grupo já demonstrou em estudos em modelo experimental de DPOC e em tecidos de pacientes DPOC, o papel da resposta TH17 na progressão desta doença com diminuição das células Tregulatórias. Objetivos: Neste sentido, teremos como objetivo neste estudo avaliar em modelo de sobreposição de Asma e DPOC o papel da imunidade adaptativa neste processo, avaliando mais especificamente o papel da resposta Th17 e Th2 neste processo, bem como o envolvimento das proteínas intracelulares STAT (do inglês "Signal Transducer and Activator of Transcription") e SOCS (do inglês "Supressor Of Cytokine Signaling") na diferenciação das células TCD4+ naive em seus subtipos. Plano de trabalho e metodologia: Serão utilizados camundongos BALB/c machos (peso médio 26g), provenientes do Biotério Central da Faculdade de Medicina da USP (FMUSP). Os animais serão submetidos ao protocolo de Indução de Sobreposição de Asma e Enfisema; grupos experimentais: A) grupo SF: Inalações com soro fisiológico (SF) estéril (n=16); B) grupo OVA: Inalações com solução ovoalbumina (OVA) (n=16); C) grupo ELA: instilações intratraqueal de elastase (n=16); D) grupo ACOS: Inalações com solução de OVA e instilações intratraqueais de elastase (n=16). Coleta e processamento do tecido pulmonar e amostras de sangue: Os animais de cada grupo serão anestesiados com Thiopental (50 mg/kg, por via intraperitonial) para retirada de sangue através da veia cava abdominal. Logo após, ainda anestesiados, os animais serão eutanasiados através da exsanguinação desta mesma via para retirada dos pulmões. O tecido pulmonar retirado será congelado em nitrogênio líquido e depois mantido em freezer -70ºC e somente será descongelado no momento de realizar as análises. As amostras de sangue serão centrifugadas e será recuperado o sobrenadante para armazenamento em freezer -70ºC (Toledo et al., 2013). Imunoblotting do tecido pulmonar: Conforme descrito no projeto 1, mas utilizando o anticorpo primário para SOCS 1, 3 e STATS 3, 5, 6 e beta actina para controle endógeno. Imunohistoquímica do tecido pulmonar: Método conforme descrito no projeto 1, mas utilizando os anticorpos primários a seguir: Stat3 (F-2), p-Stat3 (B-7), Stat 5, SOCS-1 (H93), SOCS-3 (H-103), IL-17, FOXP3, Stat6, pStat6, IL-4 e IL-13. Após as colorações específicas, serão feitas as análises morfométricas para quantificação da densidade de células positivas por área de tecido. ELISA: Conforme descrito no projeto 1: Serão utilizados os kits específicos para camundongos da marca R&D Systems (Boston, EUA), para detecção de IL-6 (M6000B), IL_10 (M1000B), IL-17 (M1700), TGF-beta (MGD150), IL-4 (MAB404R) e IL-13 (M1300 CB). Análise estatística: As análises estatísticas serão realizadas através do software Sigma Stat 11.0, no qual se aplicará o Teste T-student. Um valor de p<0,05 será considerado estatisticamente significativo. (AU)