Comparação de métodos de quantificação de formas morfológicas e biofilmes de Candida albicans submetidos a terapias antifúngicas

• Processo: 21/08890-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2021
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2022
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Ewerton Garcia de Oliveira Mima
• Beneficiário: Maria Carolina de Albuquerque
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FOAr). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Assunto(s): Microbiologia oral Biofilmes Leveduras Hifas Contagem de células Contagem de colônia microbiana Candida albicans Reação em cadeia por polimerase (PCR) Terapia fotodinâmica antimicrobiana Microscópio eletrônico
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biofilme | Cândida Albicans | Contagem de células | Contagem de Colônia Microbiana | Hifas | Leveduras | Reação em Cadeia da Polimerase | Prótese, Microbiologia oral

Resumo

Candida albicans é o principal fungo patógeno que acomete os seres humanos e que apresenta a capacidade de se desenvolver em diferentes morfologias (leveduras, pseudo-hifas e hifas), característica essa denominada de polimorfismo. Esse polimorfismo e terapias antifúngicas comprometem os métodos de quantificação que requerem precisão e acurácia, como as pesquisas que envolvem fungos filamentosos. O objetivo deste estudo será comparar os métodos de quantificação de C. albicans por unidades formadoras de colonias (UFC/mL), por reação em cadeia de polimerase quantitativa (qPCR) e por atividade metabólica (Ensaio XTT) com a contagem de células viáveis e de núcleos celulares em Microscópio Confocal após terapias antifúngicas. Cepa padrão de C. albicans (SC5314) será cultivada nas formas de levedura e de filamentos e submetida ao tratamento com fluconazol ou Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) mediada pela curcumina e luz LED. As culturas tratadas serão submetidas a tres metodos de quantificação: UFC/mL, contagem celular e qPCR. Para contagem celular, o microscópio confocal será utilizado com a suspensão fúngica tratada com diferentes marcadores fluorescentes para evidenciar células viáveis, células não viáveis e os núcleos celulares. Para a qPCR, um agente intercalante de ligação cruzada ao DNA será utilizado para excluir o DNA de células não viáveis. Biofilmes também serão cultivados por 48 horas, tratados com fluconazol ou aPDT e submetidos aos mesmos testes mencionados para as culturas planctônicas, além do ensaio de XTT. Os dados serão submetidos a uma análise de concordância (Coeficiente de Correlação Intraclasse e Bland-Altman) e de correlação (alfa = 5%) entre os métodos (UFC/mL, contagem celular, qPCR e XTT). (AU)