Caracterização das proteínas quinases envolvidas no controle do metabolismo em Tripanosomatídeos

• Processo: 21/12527-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2021
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2022
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Sergio Schenkman
• Beneficiário: Michel Augusto Silva
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 20/07870-4 - Mecanismos de adaptação de tripanossomatídeos ao hospedeiro através de controle da transcrição, síntese proteica e secreção de vesículas extracelulares, AP.TEM
• Assunto(s): Metabolismo Proteínas quinases Imunoprecipitação Immunoblotting Trypanosoma cruzi
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: metabolismo | Proteina quinase | Trypanosoma cruzi | Biologia Celular e Molecular de Parasitas

Resumo

Em nosso laboratório obtivemos parasitas expressando a subunidade a1 e a2 bem como da subunidade g da proteína quinase AMPK de T. cruzi contendo a sequência do peptídeo Myc utilizando a técnica de CRISPR/Cas9. Também verificamos que a estas subunidades são fosforiladas quando os parasitas são incubados com glucose oxidase e glicose para produzir peróxido de hidrogênio. Assim, pretendemos imunoprecipitar lisados de formas epimastigotas do parasita e após separação em gel de poliacrilamida contendo SDS identificar as proteínas associadas na presença ou ausência do sistema indutor de peróxido. Também pretendemos testar a atividade diferencial de proteína quinase das amostras imunoprecipitadas e verificar se ocorre ubiquitinação por imunoblot usando anticorpos anti-ubiquitina (AU)