Preparo de amostras de espermatozoides de camundongos para ensaios de Western blot e imunofluorescência.

• Processo: 22/00605-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2022
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2022
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Bioquímica e Molecular
• Pesquisador responsável: Erick José Ramo da Silva
• Beneficiário: Clara Correa Duarte
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/04746-3 - Interactoma da proteína EPPIN no espermatozoide humano: caracterização funcional e aplicações em estratégias farmacológicas para contracepção masculina, AP.R
• Assunto(s): Camundongos Espermatozoides Imunofluorescência Western blotting
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: camundongo | Espermatozóide | imunofluorescência | Western blot | Farmacologia da Reprodução

Resumo

O processamento adequado de amostras biológicas é fundamental para o bom andamento de protocolos como Western blot e imunofluorescência. Em nosso laboratório, ambas as metodologias são amplamente utilizadas para a avaliação da expressão e distribuição de proteínas em amostras de espermatozoides de camundongos. O objetivo desse projeto é capacitar um aluno(a) de graduação para prover apoio técnico necessário para a realização de ensaios de Western blot e imunofluorescência em amostras de espermatozoides murinos. Para tanto, o(a) bolsista TT-1 receberá treinamento em técnicas de coleta de espermatozoides de camundongos, tanto do epidídimo quanto do sistema reprodutor feminino após coito; seu processamento para: (i) extração de proteínas totais, separação por eletroforese em gel de acrilamida e imunomarcação com anticorpos contra proteínas de interesse, e (ii) preparação de esfregaços celulares, técnicas de fixação de células e de protocolos de imunofluorescência. Por fim, o(a) bolsista participará da captura e análise dos resultados e auxiliará na elaboração de relatórios experimentais.