Efeito de mutações no gene Aire induzidas por Crispr-Cas9 na atividade transcricional, pós transcricional de células mTEC e sua função sobre a migração de timócitos

• Processo: 22/01801-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2022
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunogenética
• Pesquisador responsável: Geraldo Aleixo da Silva Passos Júnior
• Beneficiário: Letícia Agrelli de Brito
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 17/10780-4 - Efeito de mutações no gene AIRE (síndrome APS1) induzidas por CRISPR-Cas9 na conformação da proteína, no transcriptoma de células mTEC e na sua interação com timócitos, AP.TEM
• Assunto(s): Biologia molecular Timócitos CRISPR-Cas9 Mutação Movimento celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: CRISPR-Cas9 | Gene Aire | Timócitos | Biologia Molecular

Resumo

O (a) bolsista terá seu treinamento técnico no contexto do estudo do efeito de determinadas mutações no gene Aire, associadas com a síndrome APS1, sobre dois dos processos essenciais das células mTEC durante a indução de tolerância imunológica central no timo, ou seja, a adesão de mTECs-timócitos e a migração de timócitos pelas mTECs. O (a) bolsista trabalhará com o sistema modelo de migração dos timócitos (ensaio transwell). Acompanhará a seleção das mutações do gene Aire humano (domínio SAND e PHD) para construir o plasmídeo CRISPR-Cas9, e manipulará as transfecções de células mTEC e seleção e caracterização dos clones Aire mutantes. As células mTEC controle (wt) e mTEC Aire mutantes servirão para o ensaio transwell (migração celular). Dessas mesmas células, o (a) bolsista fará extrações de RNA total, cujas amostras serão hibridizadas em microarrays para avaliarmos as eventuais alterações nos transcriptoma (mRNAs), no mirnoma (miRNAs) e as interações pós-transcricionais envolvendo miRNAs-mRNAs. (AU)