Caracterização funcional dos genes CCNA_02417 e CCNA_02418 durante o reparo de DNA em Caulobacter crescentus

• Processo: 22/04993-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Rodrigo da Silva Galhardo
• Beneficiário: Henrique Kustor Antonini
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 19/19435-3 - Papel de danos no DNA e função mitocondrial em envelhecimento vascular, imune e neurológico (DNA MoVINg), AP.TEM
• Assunto(s): Genética molecular Reparo do DNA Mutagênese Caracterização funcional Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (qRT-PCR) Caulobacter crescentus
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Caulobacter crescentus | luz ultravioleta | Mutagênese | reparo de DNA | Reparo de DNA e mutagênese

Resumo

O sequenciamento genético de Caulobacter crescentus permitiu identificar as fases de leitura aberta (ORFs) e genes em seu genoma. Alguns destes genes encontram-se conservados, sendo possível predizer sua função. Por sua vez, outros ainda não haviam sido caracterizados adequadamente, incluindo-se o operon formado pelos genes CCNA_02417 e CCNA_02418, o qual codifica proteínas de reparo de DNA que, juntas, acredita-se configurar um sistema de reparo nunca antes descrito, parte da resposta SOS em C. crescentus. Dados ainda não publicados de nosso grupo indicam o envolvimento de ambos os genes em reparo de DNA, configurando um possível novo sistema de reparo de fotoprodutos, independente de luz, que atua em células vegetativas não esporulantes. Propôs-se que CCNA_02417 e CCNA_02418 possuem atividade complementar no reparo de dímeros de uracila, formados pela desaminação de dímeros de citosina, que por sua vez são fotoprodutos, de modo que a correção desta lesão de DNA será efetiva e evitará mutações somente na presença de ambos. Assim, é esperado que as proteínas tenham proximidade física durante sua atividade. CCNA_02418 possui um domínio de função desconhecida (DUF 4130) que é encontrado frequentemente em operons contendo genes que codificam proteínas semelhantes à CCNA_02417. Através deste projeto, pretendemos confirmar a interação entre CCNA_02417 e CCNA_02418 utilizando o sistema duplo-híbrido e especificar o domínio da segunda que participa da interação, caso esta ocorra, e, ainda, verificar a estabilidade do RNA mensageiro deste operon nos mutantes CCNA_02417 e CCNA_02418 através de qRT-PCR para comparar os resultados com ensaios de complementação já realizados por nosso grupo de pesquisa.(AU)