Mecanismos de controle da regulação de beta-lactamases de Chromobacterium violaceum

• Processo: 22/07135-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: José Freire da Silva Neto
• Beneficiário: Luís Gustavo Laranjeiro Alves
• Supervisor: Isabel da Silva Henriques
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Universidade de Coimbra (UC), Portugal
• Vinculado à bolsa: 21/01911-3 - Vias de sinalização e de regulação das beta-lactamases de Chromobacterium violaceum, BP.MS
• Assunto(s): Chromobacterium violaceum Fatores de transcrição Resistência microbiana a medicamentos Transdução de sinais beta-Lactamases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: antibióticos beta-lactâmicos | Chromobacterium violaceum | fatores de transcrição | resistencia a antibióticos | síntese e degradação do peptidoglicano | vias de sinalização | Genética de bactérias

Resumo

A parede celular bacteriana é composta de peptideoglicano, uma macromolécula que atua conferindo rigidez, resistência e estabilidade osmótica. O ciclo de síntese, degradação e reciclagem do peptidoglicano é fundamental para a homeostase da célula bacteriana. Usados na linha de frente contra diferentes infecções, os antibióticos ²-lactâmicos impedem a síntese do peptidoglicano. Diferentes formas de resistência bacteriana aos antibióticos ²-lactâmicos já foram relatadas, sendo a principal, a produção de enzimas ²-lactamases que os inativam por clivagem. A hiperprodução de ²-lactamases pode ocorrer por mutações na via de reciclagem do peptideoglicano, principalmente em ampD, o qual codifica amidases que atuam neste elegante processo de reciclagem. Estudos anteriores do nosso grupo indicam que a bactéria oportunista ambiental Chromobacterium violaceum é intrinsecamente resistente aos antibióticos beta-lactâmicos por expressar duas beta-lactamases cromossômicas, AmpC e CphA. Neste projeto de mestrado, buscamos entender como estas beta-lactamases são reguladas. Para isso, isolamos mutantes espontâneos de C. violaceum no antibiótico ceftazidima e confirmamos por antibiograma que 19 isolados são também resistentes a outros antibióticos ²-lactâmicos. A maioria desses mutantes superexpressam ambas as ²-lactamases (AmpC e CphA). O sequenciamento dos genes ampDs (CV_0566, CV_1309 e CV_3031) nesses mutantes revelou que 10 deles possuem mutações em um único gene ampD, o CV_0566, enquanto que os demais têm sua resistência atrelada a outros componentes do genoma que não ampD. Neste proposta de BEPE, pretendemos caracterizar mutantes espontâneos e mutantes nulos em genes da via de reciclagem do peptideoglicano com a finalidade entender como ocorre a regulação da expressão das ²-lactamases AmpC e CphA de C. violaceum. (AU)