Clonagem, expressão e purificação da Tiamina Monofosfato Quinase (ThiL) recombinante de enterobactérias de relevância clínica.

• Processo: 23/06799-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Marcelo Ferreira Marcondes Machado
• Beneficiário: Isabela Amie Nascimento Matsukuma
• Instituição Sede: Instituto Nacional de Farmacologia (INFAR). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Antibióticos Farmacorresistência bacteriana Tiamina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antibióticos | Ram | Resistência Bacteriana | Tiamina | Enzimologia, Biotecnologia

Resumo

Devido ao aparecimento de bactérias resistentes aos antibióticos atuais, o desenvolvimento de novos antibióticos permanece como um dos maiores desafios da medicina moderna. O surgimento de mecanismos de resistência aos antimicrobianos mais utilizados atualmente indica a necessidade de desenvolvimento de novos métodos terapêuticos. A tiamina tem sua biossíntese presente apenas em organismos procariotos, uma vez que os eucariontes não possuem uma maquinaria celular capaz de realizar este processo, esta molécula é descrita como um importante composto para sobrevivência de ambos, à medida que, devido às ações de diferentes enzimas, produz-se um importante cofator para processos metabólicos denominado tiamina pirofosfato (TPP). Estudos recentes demonstram o potencial da tiamina monofosfato quinase (ThiL) como alvo para o desenvolvimento de novos fármacos com ação específica em células procarióticas. A ThiL é responsável por catalisar a reação de fosforilação da tiamina monofosfato (TMP) em TPP, um importante cofator para metabolismo bacteriano. Este projeto tem como principal objetivo a clonagem, expressão e purificação da ThiL recombinante de diferentes enterobactérias, são elas: Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa e Escherichia coli, obtidas em parceria com Laboratório Especial de Microbiologia Clínica/ALERTA. As enzimas obtidas na execução deste projeto serão utilizadas em nosso grupo de pesquisa para os estudos de caracterização bioquímica.