Avaliação dos receptores colinérgicos em células A549 e BEAS-2b estimuladas com IL13 e elastase neutrofílica

• Processo: 23/09694-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2024
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Iolanda de Fátima Lopes Calvo Tibério
• Beneficiário: Vitória Caroline de Queiroz
• Supervisor: Ayman K. Hamouda
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of Texas at Tyler (UT Tyler), Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 22/02510-5 - Participação da via colinérgica antiinflamatória em modelo de Síndrome de Sobreposição Asma-DPOC (ACOS), BP.DD
• Assunto(s): Receptores colinérgicos Transdução de sinais Receptores nicotínicos Receptores muscarínicos Asma Doença pulmonar obstrutiva crônica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cell signaling pathways | Chronic inflammation | Nicotinic and muscarinic receptor subtypes | Pulmonary cells | Inflamação das vias aéreas

Resumo

A asma brônquica e a doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) são distúrbios respiratórios comuns caracterizados por inflamação crônica e obstrução das vias aéreas. A asma está associada à hiperreatividade brônquica e é influenciada por fatores genéticos e ambientais, enquanto a DPOC engloba enfisema e bronquite, resultando em obstrução das vias aéreas pequenas. A coexistência de asma e DPOC, conhecida como sobreposição de asma-DPOC (ACO), apresenta desafios diagnósticos devido aos sintomas sobrepostos. Ambas as doenças contribuem significativamente para a morbidade e mortalidade global. Objetivo: Avaliar se IL-13 e elastase neutrofílica (NE) modulam a expressão de receptores nicotínicos em células pulmonares. Metodologia: A linha celular epitelial brônquica BEAS-2B e a linha celular de adenocarcinoma pulmonar humano A549 serão utilizadas em experimentos in vitro. Para simular lesão relacionada à asma, ambas as linhas celulares serão tratadas com IL-13, enquanto a elastase neutrofílica (NE) será usada para simular a doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC). Além disso, uma combinação de IL-13 e NE será aplicada para simular a sobreposição de asma e DPOC (ACO). A viabilidade celular será avaliada usando o ensaio MTT, e os níveis de IL-17, IL-8, IL-4 e IL-6 serão medidos no meio de cultura usando kits de ELISA. Além disso, a PCR em tempo real será realizado para avaliar a expressão gênica dos subtipos de receptores nicotínicos ±7, ±4 e ²2, bem como receptores muscarínicos (M),assim como,avaliação de espécies reativas de oxigênio (ROS). Ensaios de ligação de radioligantes serão realizados por meio de ensaios de centrifugação para determinar a ligação de radioligantes não seletivos e seletivos de subtipos em membranas ricas em nAChR. Os métodos experimentais aplicados neste estudo fornecerão uma análise abrangente da expressão de receptores nicotínicos e muscarínicos em células pulmonares submetidas a diferentes tipos de lesão. A análise de dados será realizada usando o programa SigmaStat. (AU)