Caracterização funcional de uma proteína salivar do tipo Trypsin inhibitor-like do Carrapato-do-boi, Rhipicephalus microplus

• Processo: 23/12568-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 05 de fevereiro de 2024
• Data de Término da vigência: 04 de maio de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Aparecida Sadae Tanaka
• Beneficiário: Gabriel Cerqueira Alves Costa
• Supervisor: Lucas Tirloni
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Rocky Mountain Laboratories, Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 20/02433-5 - Construção de uma biblioteca de fragmentos de cDNA de enzimas proteolíticas (peptidases) e serpinas de R. microplus na superfície de fagos filamentosos, BP.PD
• Assunto(s): Phage display Rhipicephalus microplus
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: anti-tick vaccine | phage display | Rhipicephalus microplus | Arthropod vectors biochemistry

Resumo

Rhipicephalus microplus, também conhecido como carrapato-do-boi, é uma das espécies de carrapatos com maior importância no Brasil. Este ectoparasito está relacionado a infecções severas em animais na pecuária, resultando em perdas econômicas expressivas ao agronegócio em países tropicais e subtropicais. A principal estratégia empregada no controle é a utilização de acaricidas químicos, que podem apresentar várias desvantagens, como a seleção de populações resistentes, além da poluição ambiental. Portanto, métodos alternativos de controle vêm sendo estudados e dentre os mais promissores estão as vacinas anti-carrapatos, que apresentaram resultados satisfatórios contra o R. microplus em diferentes regiões do mundo. Entretanto, a descoberta de novas moléculas imunogênicas produzidas por R. microplus é necessária para o desenvolvimento de uma formulação vacinal que seja altamente eficiente contra as populações de carrapatos brasileiras. Dessa forma, o principal objetivo do presente trabalho é a realização da caracterização funcional de uma proteína salivar imunogênica presente na saliva de fêmeas de R. microplus durante o processo hematofágico. Esse alvo foi identificado a partir da realização de um screening por meio da técnica de phage display, aliado ao sequenciamento de DNA utilizando a tecnologia Nanopore. Uma biblioteca de phage display construída a partir de transcritos das glândulas salivares de R. microplus foi apresentada a anticorpos IgG anti-saliva de carrapatos produzidos em bovinos infestados experimentalmente por repetidas vezes com carrapatos-do-boi. O peptídeo selecionado com maior frequência correspondeu a uma proteína rica em resíduos de cisteína e contendo um domínio trypsin inhibitor-like (TIL), sendo nomeada como RmTIL. Essa proteína será produzida de forma recombinante e funcionalmente caracterizada de acordo com sua atividade inibitória contra diferentes serino proteases, incluindo proteases bovinas produzidas pelo grupo de pesquisa do Dr. Tirloni no Rocky Mountain Laboratories (RML), NIH. Adicionalmente, experimentos para avaliar a inibição dos processos de reparo de tecidos, permeabilidade vascular e formação de edema em camundongos também serão realizados em colaboração com o Dr. Tirloni. Por fim, ensaios de imunização serão realizados com RmTIL recombinante para confirmar a sua imunogenicidade e os anticorpos produzidos serão quantificados. A análise funcional deverá gerar importante conhecimento acerca do papel da proteína salivar na interação carrapato-hospedeiro, além da avaliação do seu potencial para ser utilizada no desenvolvimento de novas estratégias para o controle do R. microplus.