Estudo da Regulação da Expressão de RECK por miRNAs em Células que Expressam Genes de HPV

• Processo: 23/12750-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2024
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2028
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia
• Pesquisador responsável: Enrique Mario Boccardo Pierulivo
• Beneficiário: Amanda Campos Nocera
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Neoplasias do colo uterino Matriz extracelular MicroRNAs MMP Infecções por Papillomavirus
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer cervical | matriz extracelular | MicroRNAs | Mmp | papilomavírus humano | Reck | Oncovirologia

Resumo

A infecção persistente pelo Papilomavírus Humano está etiologicamente associada a um conjunto de patologias, especialmente o câncer cervical. Um dos cenários que permite o estabelecimento e a manutenção destas doenças é o de alterações no microambiente tumoral. Trabalhos de nosso grupo de pesquisa indicam que a expressão de RECK, proteína de localização membranar que regula a atividade de metaloproteinases do microambiente, está diminuída em amostras clínicas de cânceres cervicais e suas linhagens derivadas. Este cenário favorece a progressão da doença. Contudo, os mecanismos que levam à modulação negativa dos níveis desta proteína ainda não estão totalmente esclarecidos. No presente trabalho, será investigada a participação de miRNAs na regulação negativa do gene que codifica tal proteína, os quais foram selecionados através de análises de bioinformática previamente conduzidas por nosso grupo de pesquisa. Primeiramente, o perfil de expressão destas moléculas será avaliado em linhagens celulares derivadas destes tumores, bem como a expressão de RECK mediante ganho ou perda de função dos miRNAs. Em seguida, a regulação negativa do gene pelos miRNAs será validada através de um ensaio de gene repórter, utilizando-se vetores contendo a região 3'UTR de RECK mutada para os sítios de ligação aos miRNAs selecionados a jusante do gene da luciferase. Por fim, serão avaliados os efeitos gerados sobre morte, proliferação, invasão e migração das células quando há ganho ou perda de função dos miRNAs. Adicionalmente, analisaremos o papel dos miRNAs escolhidos sobre a comunicação com outras células do microambiente, como fibroblastos e células endoteliais, através de exossomos.