O efeito da diacereína sobre marcadores de atividade de células ósseas na doença periodontal induzida

• Processo: 23/15699-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2024
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Histologia
• Pesquisador responsável: Paulo Sergio Cerri
• Beneficiário: Lays Cristina Gouvea
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FOAr). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Assunto(s): Imuno-histoquímica Osso alveolar Osteoblastos Osteoclastos Histologia oral
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: imuno-histoquímica | osso alveolar | osteoblasto | osteoclasto | Histologia Oral

Resumo

A periodontite (P) é uma doença multifatorial e imunoinflamatória que está associada a degradação do tecido periodontal (tecidos moles e duros). A progressão da P está sob um controle de diversos mediadores entre eles interleucina 1 (IL-1), fator de necrose tumoral (TNF- ±), metaloproteinases da matriz (MMPS). Estes mediadores promovem a formação, diferenciação e atividade de osteoclastos levando a reabsorção óssea. A diacereína é uma droga anti-inflamatória, que inibe a IL-1 e TNF-±, usada no tratamento de artrite reumatoide, doença similar a P. O objetivo do presente estudo é avaliar se a diacereína reduz a imunoexpressão de MMP-9 e V-ATPase, enzimas envolvidas na atividade de osteoclastos na P induzida em molares de ratos. Além disso, será avaliado se a diacereína interfere com a osterix e a fosfatase alcalina, fatores associados com a diferenciação e atividade de osteoblastos. A imunoexpressão de IL-10, interleucina associada com o reparo tecidual também será analisada nos tecidos periodontais. 54 ratos Holtzman serão distribuídos em GPD (grupo com periodontite tratado com diacereína), GPS (grupo com periodontite sham) e GC (grupo controle; periodonto saudável). A P será induzida com a inserção de um fio de algodão no colo cervical nos primeiros molares superiores. Após 7 dias, a ligadura será removida e os ratos com a P induzida irão receber 100mg/kg de massa corporal de diacereína (GPD) ou solução salina (GPS) por gavagem durante 7, 15 e 30 dias. Assim, em cada grupo serão utilizados 6 animais por período. Após a inclusão em parafina, os cortes não-seriados serão corados com hematoxilina e eosina (HE) para seleção da região de interesse (gengiva interdental, localizada entre o primeiro e o segundo molares, e processo alveolar ao redor das raízes do primeiro molar). Os cortes serão submetidos às reações de imunofluorescência/imuno-histoquímica para detecção de V-ATPase, MMP-9, osterix, fosfatase alcalina e IL-10. A quantificação da imunoexpressão de V-ATPase e MMP-9 em osteoclastos será realizada usando um microscópio fluorescente e o software Leica Application Suite-LAS4.3. A área total do osteoclasto será mensurada e, posteriormente, a área imunofluorescente à V-ATPase e MMP-9 também serão mensuradas. Dessa forma, será obtida a porcentagem da área imunofluorescente para V-ATPase e MMP-9 nos osteoclastos. O número de células imunomarcadas para fosfatase alcalina, osterix e IL-10 será computado numa área padrão usando um microscópio de luz Olympus e um software de análise de imagem. Os dados quantitativos serão submetidos ao two way ANOVA e pós teste de Tukey (p < 0,05).