Caracterização molecular de sequências promotoras de transcrição em Plasmodium

• Processo: 23/18376-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Roberto Rudge de Moraes Barros
• Beneficiário: Thafne Plastina Astro
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 25/00663-7 - Uso da tecnologia de RNA-seq para analisar alterações trancricionais em Plasmodium knowlesi, BE.EP.DD
• Assunto(s): Estresse Plasmodium
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Controle transcricional | estresse | Plasmodium | scRNAseq | Biologia Molecular de Plasmodium

Resumo

Poucos elementos de controle transcricional foram identificados em Plasmodium, e muitos são distintos de seus homólogos de eucariotos. Foram descobertos membros da família de Fatores de Transcrição (TF) ApiAp2 que foram relacionados ao desenvolvimento de esporozoítas, oocinetos e gametócitos em P. berghei e P. falciparum. No entanto, tentativas de caracterizar sequências reguladoras de P. vivax usando transfecção heteróloga de P. falciparum falharam, sugerindo diferenças na maquinaria de controle da transcrição entre as espécies.Recentemente foi observado que as sequências regulatórias de P. vivax - sequências promotoras dos genes pvcrt (P. vivax chloroquine resistance transporter), pvcam (P. vivax calmodulin) e pvhsp70 (P. vivax heat shock protein 70) são capazes de controlar a expressão de um gene repórter luciferase em linhagens transgênicas de P. knowlesi. Os resultados indicam uma conservação da maquinaria de transcrição e que estas sequências podem ter domínios altamente conservados.Para compreender o controle de transcrição de parasitas do ramo de malária dos primatas caracterizamos a sequência promotora do gene pvhsp70, para identificar domínios conservados. Para atingir este objetivo foram feitas análises in sílico e experimentos de transfecção heteróloga de P. knowlesi. Para caracterizar a transcrição dos genes hsp70 e crt de P. knowlesi e P. vivax estamos efetuando experimentos de PCR em tempo real e de sequenciamento de RNA de célula única. Estes experimentos nos permitem observar o controle transcricional destes genes durante o ciclo de vida intraeritrocítico e em resposta ao tratamento com cloroquina (CQ). Os resultados nos permitirão compreender melhor como funciona o controle transcricional em P. knowlesi e P. vivax, e se alterações transcricionais podem estar envolvidas em mecanismos de virulência e resistência à antimaláricos.