Explorando os efeitos do canestat, uma nova proteína híbrida, na dinâmica e composição do microbioma oral

• Processo: 24/14291-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 20 de janeiro de 2025
• Data de Término da vigência: 19 de janeiro de 2026
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Periodontia
• Pesquisador responsável: Marília Afonso Rabelo Buzalaf
• Beneficiário: Carolina Ruis Ferrari
• Supervisor: Magda Feres Figueiredo
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Bauru (FOB). Universidade de São Paulo (USP). Bauru , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Harvard University, Boston, Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 21/14161-2 - Produção recombinante e avaliação funcional de uma proteína híbrida com potencial de interação com a hidroxiapatita, para proteção contra a cárie e erosão dentária, BP.DD
• Assunto(s): Biofilmes Microbiota
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biofilme | cistatina | Estaterina | Microbioma | Bioquímica - Biologia Oral e Periodontia

Resumo

O estudo se concentra na modificação da película adquirida (PA), um fator crucial na proteção contra cáries dentárias, desgaste erosivo dos dentes e modificação do biofilme. Avanços nas técnicas "ômicas" revelaram proteínas resistentes a ácidos na PA, impulsionando os "procedimentos de engenharia da película adquirida". Assim, enriquecer esta camada com proteínas altamente ligadas à hidroxiapatita, influenciando potencialmente a formação do biofilme. CaneCPI-5, uma cistatina derivada da cana-de-açúcar, e StatpSpS, um peptídeo de 15 aminoácidos da statherina, destacam-se entre as proteínas encontradas na AP. O objetivo deste estudo é analisar o impacto do enxaguatório bucal contendo uma proteína híbrida recombinante com CaneCPI-5 e StatpSpS, denominado "CaneStat" na dinâmica e composição do microbioma oral, influenciado pela PA. Um total de quarenta e oito pacientes saudáveis e com gengivite serão recrutados de acordo com os critérios de inclusão. Antes da intervenção, os participantes passarão por profilaxia dentária abrangente usando pedra-pomes, acompanhada de instruções detalhadas sobre práticas de higiene oral. Isso será seguido por um enxágue de 5 mL com um placebo ou uma solução contendo a molécula CaneStat 0,05 mg/mL (concentração predeterminada em um estudo piloto - dados não publicados) por 1 min. Para visitas subsequentes em 24 e 48 horas, bem como em 1 semana e 1 mês, os participantes receberão reforço adicional de instruções de higiene oral. Durante essas visitas, amostras de biofilme serão coletadas para a hibridização Checkerboard DNA-DNA e análise de sequenciamento Illumina (16S rRNA). Os sinais obtidos para amostras processadas pela hibridização Checkerboard DNA-DNA serão convertidos em contagens absolutas com base em controles de 105 e 106 células. Esses dados serão expressos como contagens de sondas de DNA e computados por indivíduo. Contagens médias e desvios-padrão (DP) serão calculados para cada espécie bacteriana em cada grupo. A significância das diferenças será determinada usando o teste t de Student para amostras independentes entre pacientes saudáveis e com gengivite. Entre os saudáveis e gengivites nos diferentes pontos de tempo, a significância das diferenças será determinada pelo teste U de Mann-Whitney. Variáveis de interesse no perfil microbiano serão avaliadas por meio de análises de correlação e do teste qui-quadrado. Nos resultados do sequenciamento de próxima geração (NGS), conduziremos investigações bioinformáticas abrangentes. A pesquisa em desenvolvimento alavancará análises de diversidade alfa e beta para retratar vividamente nuances em diferenças ou similaridades entre grupos diversos. Além disso, nossa investigação sobre abundância diferencial utilizará as análises ANCOM-BC (Análise de composições de microbiomas com correção de viés) e LefSe (Análise discriminante linear do tamanho do efeito). O critério estabelecido para significância estatística nesta próxima exploração é definido em p < 0,05. Esta pesquisa antecipatória se esforça para desvendar padrões microbianos intrincados, contribuindo com insights valiosos para o reino da análise do microbioma.