Avaliação de alterações epigenéticas de receptores de estrógeno em modelos in vitro de tauopatias

• Processo: 25/05035-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2025
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Neuropsicofarmacologia
• Pesquisador responsável: Rodrigo Portes Ureshino
• Beneficiário: Pedro Henrique Zonaro
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 24/04261-8 - Investigação de alterações mitocondriais em modelos in vivo e in vitro de tauopatias: avaliação de intervenções com compostos estrogênicos, AP.R
• Assunto(s): Epigenômica Metilação de DNA Neuroproteção Receptores de estrogênio Degeneração neural
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: epigenética | metilação de DNA | Neuroproteção | receptores de estrógeno | tauopatia | Neurodegeneração

Resumo

Diversos estudos têm avaliado o papel neuroprotetor dos estrogênios em doenças neurodegenerativas, e pesquisas têm se buscado relacionar a atividade dos receptores de estrógeno com a modulação de processos fisiopatológicos. As tauopatias são doenças neurodegenerativas caracterizadas pela diminuição da função cognitiva, quadro clínico de demência, e em alguns casos havendo alterações de mobilidade. Nessa conformação, a proteína tau leva a um estado neurotóxico, com transporte axonal das organelas comprometido, alterando sua fisiologia. Alterações epigenéticas compõe uma série de modificações pós-traducionais que levam a respostas diversas, mesmo após a ativação do fator de transcrição indicado para determinada função celular, porém poucos estudos têm relacionado alterações proteicas associadas a neurodegeneração diretamente com padrões de mudanças epigenéticas, sendo assim, interessante investigar os efeitos globais que o acúmulo de proteínas produz em níveis transcricionais e traducionais. Nosso grupo desenvolveu um modelo de superexpressão da proteína tau (isoforma 0N4R) em células SH-SY5Y, que apresenta alterações morfológicas e na fisiologia celular, como mitocondriais, mas é importante considerar que isoformas como a full lenght 2N4R (mais comum na doença de Alzheimer) pode ter alterações diferentes à neuropatologia e biologia molecular. Assim, este projeto tem por objetivo desenvolver um modelo de superexpressão da proteína EGFP-tau 2N4R para comparação com modelo 0N4R em células SH-SY5Y. Além disso, buscaremos avaliar o padrão de metilação de DNA em receptores de estrógeno possivelmente correlacionadas a alterações nestes modelos celulares, e suas consequências na fisiologia celular. Para tanto, iremos realizar a clonagem do gene MAPT EGFP-tau 2N4R no vetor de expressão já padronizado para o modelo que expressa a isoforma 0N4R, com superexpressão condicional (sistema Tet-On), seguindo com a transdução do mesmo em células SH-SY5Y e serão validados. Para o estudo de epigenética, inicialmente, para cada gene de receptor de estrógeno (ER¿, ER¿ e GPER1) será utilizado o método de conversão de bissulfito, cujos genes serão posteriormente amplificados por PCR e sequenciados, detectando os sítios de metilação. Assim, será avaliado genes-alvo que podem estar envolvidos na neuroproteção como BDNF e Bcl-2, além do clearance da proteína EGFP-tau após o tratamento com estrógeno por método de Western Blot. Este estudo busca contribuir no entendimento da relação da proteína tau e a função mitocondrial, com enfoque no papel de compostos estrogênicos em modelo celular de DA e outras demências. (AU)