Epimune: Investigando as alterações epitranscriptômicas na interação Leishmania-hospedeiro

• Processo: 25/06837-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2025
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2029
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Nilmar Silvio Moretti
• Beneficiário: Anelise Gonçalves Marino
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 22/03075-0 - Desvendando os mecanismos regulatórios envolvidos na relação parasito hospedeiro da Leishmania: foco nas alterações pós-transcricionais e pós-traducionais, AP.PNGP.PI
• Assunto(s): Leishmania Resposta imune
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: leishmania | m6A | relação parasito-hospedeiro | resposta imune | Biologia Molecular de Leishmania

Resumo

A leishmaniose é um grupo de doenças negligenciadas causadas por protozoários do gênero Leishmania, com mais de 20 espécies capazes de infectar humanos. Durante seu ciclo de vida, o parasita alterna entre um hospedeiro invertebrado, na forma de promastigotas, e um hospedeiro vertebrado, onde está presente como amastigotas intracelulares nos macrófagos. Na fase intracelular, o parasita enfrenta o ataque da maquinaria de defesa dos macrófagos, tendo desenvolvido mecanismos de subversão do hospedeiro para isso, que podem envolver desde alterações na expressão de genes específicos até mudanças no metabolismo da célula hospedeira que garantam sua multiplicação. Recentemente, as modificações pós-transcricionais de RNA ganharam atenção como novos mecanismos regulatórios da expressão gênica e da resposta imunológica durante infecções. Mais de cem modificações de mRNA foram descritas nos últimos anos, presentes em diferentes regiões da molécula de RNA e afetando diferentes etapas da vida dessa molécula. Entre elas, a N6-metiladenosina (m6A) é a mais abundante e tem sido associada à evasão da resposta imunológica pelos vírus HIV, ZIKA e DENV, além de funções regulatórias de genes envolvidos na resposta imune durante a infecção. Considerando a capacidade da Leishmania de manipular o macrófago para progredir na infecção e as funções do m6A na resposta imune, este projeto busca investigar como a infecção pelo parasita impacta os níveis de m6A e a sua maquinaria regulatória em macrófagos. Nossos dados preliminares demonstraram tendência de aumento na expressão do writer METTL3 e redução do eraser ALKBH5. Além disso, ao avaliar os níveis de m6A observamos mudanças durante a infecção por Leishmania nos macrófagos. Para compreender quais genes, por exemplo da resposta imune, podem ser metilados por essa modificação, realizamos sequenciamento direto de RNA por Nanopore. A continuidade do projeto visa analisar os dados gerado para identificar e quantificar transcritos modificados por m6A durante a infecção. Também analisaremos a expressão de outros componentes da maquinaria de m6A, além de METTL3 e ALKBH5. Adicionalmente, pretendemos gerar linhagens de macrófagos knockout para METTL3 e ALKBH5 por meio de CRISPR/Cas9, a fim de investigar o papel funcional da m6A na infecção por L. amazonensis. As análises incluirão taxas de infecção in vitro, perfil de citocinas, expressão de iNOS e produção de NO. Desta forma, o projeto contribuirá para o entendimento das modificações pós-transcricionais e suas implicações biológicas na relação parasito-hospedeiro. (AU)