Análise da Heterogeneidade Tumoral no OSCC por Bioimpressão 3D e Triagem Funcional com CRISPR.

• Processo: 25/21508-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Pesquisa
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2026
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2027
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Katiuchia Uzzun Sales
• Beneficiário: Katiuchia Uzzun Sales
• Pesquisador Anfitrião: Rogerio Moraes Castilho
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of Michigan, Estados Unidos
• Assunto(s): Serina proteases Patologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: CRISPR-Cas9 Screening | Oral squamous cell carcinoma (OSCC) | Serine Proteases | stemness | therapy resistance | 3D organoids | Patologia

Resumo

Este estudo investigará o papel funcional das serino proteases na manutenção da stemness, utilizando organoides de carcinoma espinocelular oral (OSCC) bioimpressos em 3D e triagem baseada em biblioteca CRISPR direcionada a inibidores de tirosina-quinase (TKIs). Resultados prévios de nosso grupo indicam que a expressão de serino proteases varia conforme o estágio tumoral e a presença de marcadores associados à stemness, reforçando seu potencial como biomarcadores prognósticos e alvos terapêuticos1-4. Por meio de análises proteicas e de atividade proteolítica em organoides de OSCC bioimpressos em 3D, serão identificadas serino proteases diferencialmente expressas ao longo da progressão tumoral. As proteases selecionadas serão individualmente silenciadas por CRISPR-Cas9, e tanto organoides selvagens (WT) quanto nocautes (KO) serão submetidos à triagem com uma biblioteca CRISPR voltada a TKIs. O objetivo é determinar quais serino proteases influenciam a sensibilidade a TKIs no contexto da stemness, elucidando mecanismos de resistência e subsidiando o desenvolvimento de novas terapias-alvo para OSCC. Os organoides bioimpressos em 3D serão submetidos a análises funcionais e de atividade proteolítica, enquanto estudos mecanísticos avaliarão os efeitos do silenciamento gênico sobre crescimento celular, estabilidade genômica e resposta ao tratamento. Com o apoio da modalidade BEP-FAPESP, um estágio de um ano na Universidade de Michigan permitirá a aquisição de experiência prática em metodologias avançadas, essencial para a incorporação e adaptação dessas abordagens ao contexto da pesquisa brasileira. O trabalho, em colaboração direta com o Dr. Rogério Castilho, referência internacional em bioimpressão 3D, stemness e modelagem tumoral, possibilitará o refinamento dos sistemas de organoides e a expansão da capacidade da oncologia experimental no Brasil. Essa colaboração também visa consolidar uma parceria duradoura entre as instituições e estabelecer as bases para uma plataforma de pesquisa translacional. Além de gerar publicações, o projeto fornecerá dados preliminares capazes de sustentar uma futura Proposta Temática à FAPESP, ampliando o escopo e o impacto da investigação. (AU)