Importância da enzima DNMT1 para a metilação global em fibroblastos humanos
- Auxílios pontuais (curta duração)
| Processo: | 06/03416-0 |
| Linha de fomento: | Bolsas no Brasil - Iniciação Científica |
| Vigência (Início): | 01 de outubro de 2006 |
| Vigência (Término): | 31 de julho de 2007 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica |
| Pesquisador responsável: | Lygia da Veiga Pereira |
| Beneficiário: | Clarisse Jeker Marchi |
| Instituição-sede: | Instituto de Biociências (IB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil |
| Assunto(s): | Inativação do cromossomo X Genética molecular Metilação |
Resumo Os mamíferos possuem um mecanismo de compensação de dose de transcritos do cromossomo X, já que fêmeas possuem dois destes enquanto os machos possuem apenas um. Este mecanismo é chamado de Inativação do cromossomo X (ICX), e consiste de cinco passos: contagem, escolha, início do silenciamento, estabelecimento e manutenção do estado inativo. Os primeiros quatro passos são controlados pelo centro de inativação do X (Avner & Heard, 2001, do inglês X-inactivation centre, XIC), uma região presente em Xq13 e de tamanho não estabelecido. O XIST (do inglês X-inactive-specific transcript, Brown et al., 1991), presente no XIC, é o principal gene atuante no processo da ICX. A sua expressão, a partir de um cromossomo X é dependente do estado de metilação da sua extremidade 5´: quando metilada, o gene XIST inicia a inativação deste em cis. São conhecidas até hoje cinco metiltransferases responsáveis pela metilação global do genoma em mamíferos: Dnmt1, Dnmt2, Dnmt3a, Dnmt3b e Dnmt3L. Em camundongos foi visto que Dnmt1 e Dnmt3b são imprescindíveis para a viabilidade das células; entretanto experimentos em células humanas de carcinoma deficientes para as duas enzimas mostraram que estas metiltransferases não são tão importantes como se imaginava, já que aquelas células continuavam viáveis. O papel destas metiltransferases foi investigado na metilação do gene XIST nestas mesmas células deficientes para DNMT1 e DNMT3B, e viu-se que nestas este gene continuava reprimido. Este fato indica portanto, que estas enzimas não atuam na repressão de XIST, apesar de atuarem na metilação global de 95% do genoma humano. Entretanto, uma vez que, somente três sítios passíveis de metilação foram analisados por digestão com enzimas de restrição sensíveis à metilação faz-se necessária a confirmação destes resultados através de uma análise mais refinada. Este trabalho pretende analisar o estado de metilação dos 29 dinucleotídios CpG na região promotora do gene XIST em células HCT-116 normais e deficientes para DNMT1 e DNMT3B. | |