Estudo de mutantes envolvidos na propensão de formar alfa-hélices em mioglobina de espermacete para entender sua diferença de estabilidade em relação ao seu homólogo em cavalo

• Processo: 03/04300-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2003
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Carlos Henrique Inacio Ramos
• Beneficiário: Juliana Fattori
• Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 98/12978-3 - Estudo da estabilidade e da via de enovelamento de mioglobina, AP.JP
• Assunto(s): Biofísica Mioglobina Dobramento de proteína Estabilidade proteica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biofisica Molecular | Enovelamento De Proteinas | Estabilidade De Proteinas | Evolucao De Proteinas | Mioglobina | Mutagenesis Sitio Dirigida

Resumo

A mioglobina de cavalo e espermacete apresentam alta homologia entre suas seqüências de aminoácidos e estruturas terciárias. Apesar disto, elas possuem diferença na estabilidade quando o desenovelamento induzido por uréia é medido. Em um trabalho anterior, fomos capazes de medir esta estabilidade com relativa confiança utilizando um método por nós criado. Esta diferença de estabilidade se encontra na ordem de 2 kcal/mol a pH 5.0 e 25 ºC. Utilizando ferramentas de bioinformática e mutagênesis sítio dirigida, encontramos que 2 pontes salinas previstas, pela análise da estrutura tridimensional, para existirem na mioglobina de espermacete mas não na de cavalo, seriam responsáveis por aproximadamente metade da diferença da estabilidade medida. Pela comparação da seqüência de aminoácidos de mioglobina de vários mamíferos, notamos que os resíduos envolvidos nas pontes salinas acima citadas são conservados na mioglobina de cetáceos mas não na de mamíferos 'terrestres'. O mesmo acontece com 2 resíduos de Alanina, uma no terço final da hélice A e outro no da hélice E, que são substituídos por Glicina na mioglobina de cavalo. Como Alanina é um resíduo que, ao contrário de Glicina, aumenta a propensão de alfa-hélices, propomos que esta deve ser a fonte da diferença de estabilidade restante. Para tanto, pretendemos produzir mutantes pontuais e duplos trocando estas Alaninas por Glicina em mioglobina de espermacete e medir a estabilidade dos mesmos para verificar se a hipótese está correta. (AU)