Construção de plasmídeos para transformação do fungo patogênico Paracoccidioides brasiliensis e inativação de genes via interferência de RNA

• Processo: 06/61695-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Flavia Villaça Morais
• Beneficiário: Sarah de Moura Pedroso
• Instituição Sede: Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento (IP&D). Universidade do Vale do Paraíba (UNIVAP). São José dos Campos , SP, Brasil
• Assunto(s): Genética molecular Inativação gênica Interferência de RNA Plasmídeos Paracoccidioides brasiliensis
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Funcao De Genes | Genetica Molecular | Interferencia De Rna | P Brasiliensis | Plasmideos | Transformacao

Resumo

O Paracoccidioides brasiliensis é o fungo termo-dimórfico responsável por causar no homem a paracoccidioidomicose. A biologia deste micro-organismo tem sido estudada em diversas áreas, porém pouco avanço foi obtido na área da genética molecular. Raras são as publicações envolvendo a transformação do fungo e em nenhuma delas houve a inativação de genes. Dados ainda não publicados de nosso grupo mostram a inativação por interferência de RNA (RNAi) do gene endógeno PbrURA3, que codifica a orotidina-3 fosfato decarboxilase, envolvida na formação da base nitrogenada uracila. Assim, o presente projeto tem por objetivo a construção plasmídeos para transformação do P. brasiliensis, utilizando como base o "esqueleto" dos plasmídeos já existentes (puH, pRUi e pRUiS). Nestes três plasmídeos serão inseridas sequências teloméricas de Histoplasma capsulatum, obtidas do plasmídeo pWU55. Além disso, o plasmídeo pRUi servirá de "esqueleto" para a introdução de novos genes de interesse no estudo da biologia do fungo, especificamente o gene da calcineurina A, envolvido na virulência do fungo, e, um gene essencial no processo de autofagia (a ser escolhido dentre três que são expressos pelo P. brasiliensis). Estes plasmídeos serão utilizados posteriormente no aperfeiçoamento da técnica de transformação deste micro-organismo. (AU)