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Clonagem, sequenciamento e caracterizacao do p65 de lobulos opticos de lula.

Processo: 02/10085-9
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2002
Data de Término da vigência: 31 de julho de 2003
Área de conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Roy Edward Larson
Beneficiário:Diego Torrecillas Paula Lico
Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:99/03951-7 - Caracterização bioquímica, estrutural e celular de Miosina-V, AP.TEM
Assunto(s):Clonagem   Transmissão sináptica
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Clonagem | Miosina-V | P65 | Transmissao Sinaptica

Resumo

Neste projeto pretendemos clonar e sequenciar cDNA correspondente de um polipeptídeo de 65 k purificado de lóbulos óticos de lula. Este polipeptídeo é fortemente imunoreativo ao anticorpo anti-miosina Va de galinha, indicando que as duas moléculas compartilham um epitopo. Mais interessante é que o anticorpo anti-miosina Va de galinha, quando injetado no sinapse gigante de lula, inibiu a liberação de neurotransmissor, portanto, sugere que p65 é uma proteína envolvido em eventos sinápticos. Microsequenciamento e análises por espectroscopia de massa forneceram algumas seqüências que ainda não revelam a identidade do p65, entretanto, permitem que tentamos clonar o p65 via o desenho de primers degenerativos. O candidato, Diego Torrecillas, já vem trabalhando neste projeto como estagiário em colaboração com Dr. Sinji Tauhata de meu laboratório, aprendendo a metodologia de purificação do p65. Também, Diego iniciou os passos para a clonagem do p65, em colaboração com Dr. Cláudio Simon, pós-doutorado em nosso Departamento. Os resultados iniciais e o bom desempenho do Diego indicam a viabilidade do projeto. (AU)

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