Estudo da guanilato ciclase soluvel em eosinofilos e em linhagens de celulas eosinofilicas humano: ativacao por mecanismo independente de oxido nitrico.

• Processo: 02/07650-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2003
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2006
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Bioquímica e Molecular
• Pesquisador responsável: Gilberto de Nucci
• Beneficiário: Sara Maria Thomazzi
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Inflamação Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR) Eosinófilos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bay 41-2272 | Eosinofilos | Guanilato Ciclase Soluvel | Inflamacao | Rt Pcr

Resumo

Recentemente foi relatado que a GCs pode ser ativada por um mecanismo independente de NO, pelos ativadores específicos, os quais, hipoteticamente, não provocariam os efeitos indesejáveis do NO no uso terapêutico. Trabalhos mostram que eosinófilos humano contêm uma NOS acoplada a via de transdução do GMPc, entretanto a existência da GCs em eosinófilos só "foi demonstrada funcionalmente. Este estudo tem como finalidades: (a) demonstrar que eosinófilos humano expressam GCs, e (b) estudar a ação do BAY 41-2272, ativador específico da GCs, na quimiotaxia, adesão e sobre o nível de GMPc. Os eosinófilos serão purificados de sangue periférico humano ou provenientes de culturas de células de linhagens eosinofílicas humana. Para o estudo da expressão da GCs serão utilizados primers para as subunidades eu e Pi e a presença de RNAm será avaliada pela técnica de RT-PCR, e o anticorpo primário anti-GCs será utilizado no Western blotting. No estudo funcional com BAY, a quimiotaxia será induzida por fMLP e eotaxina, e avaliada em câmara de microquimiotaxia, após incubação dos eosinófilos com BAY e/ou ODQ. A adesão em fibronectina e soro será observada em placa de 98 poços, sendo realizada incubação prévia dos eosinófilos com BAY e/ou ODQ. Os níveis de GMPc serão medidos usando-se um kit comercial, após incubação dos eosinófilos com o BAY. Este projeto trará avanços no estudo de processos inflamatórios envolvendo este tipo celular, e talvez, na terapia usual. (AU)