Avaliação do efeito do LMP-420, um inibidor da transcrição do fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa), em linhagens celulares de mioblastos de camundongo e mastócitos de rato

• Processo: 07/03781-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2007
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Maria Cristina Ramos Costa
• Beneficiário: Ana Carolina Toschi
• Instituição Sede: Universidade de Ribeirão Preto (UNAERP). Campus Ribeirão Preto. Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Distrofia muscular de Duchenne Biologia celular e molecular Inflamação
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Distrofia Muscular de Duchenne | Fator de necrose tumoral alfa TNF-alfa | Inflamação | mastócitos RBL-2H3 | Mediador inflamatório | mioblastos C2C12 | Biologia celular e molecular

Resumo

A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é uma doença degenerativa causada por mutações no gene da distrofina, uma proteína subsarcolemal importante para a conexão do citoesqueleto de actina à matriz extracelular. É caracterizada por fraqueza muscular decorrente da degeneração progressiva da musculatura esquelética e culmina em óbito precoce por falência cardíaca ou respiratória. O camundongo mdx, modelo mais utilizado para a DMD, apresenta susceptibilidade à injúria, elevação da creatina quinase sérica e ciclos de degeneração e regeneração muscular. O fenótipo distrófico brando, se comparado ao da DMD, pode ser intensificado por atividade física compulsória. A degeneração muscular, inicialmente causada pela fragilidade do sarcolema devido à ausência da distrofina, é exacerbada por um processo inflamatório crônico, do qual participam células do sistema imune e citocinas inflamatórias. Dentre elas, o fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa), liberado por mastócitos e pelas miofibras lesadas, tem um papel chave. Estudos recentes têm demonstrado que o bloqueio do TNF-alfa,utilizando anticorpos monoclonais ou o receptor solúvel, resulta em diminuição da degeneração muscular do camundongo mdx. O objetivo deste projeto é avaliar o efeito do LMP-420, um inibidor da transcrição do TNF-alfa em linhagens celulares de mioblastos de camundongo e mastócitos de rato. Para tanto, serão utilizadas as linhagens celulares: i) C2C12 de mioblastos de camundongo, submetida ou não à injúria, na presença ou ausência de LMP-420; e ii) RBL-2H3 de mastócitos de rato, que será utilizada como controle positivo por expressar altos níveis de TNF-alfa estimulada via receptor FcERI, previamente tratada ou não com LMP-420. Análises comparativas dos níveis de expressão do TNF-alfa serão feitas por RT-PCR semiquantitativo e western blot. Ensaios de imunocitoquímica serão utilizados para verificar a localização celular do TNF-alfa. Este estudo faz parte de um projeto mais amplo que visa avaliar o efeito do LMP-420 na progressão da distrofinopatia do camundongo mdx. Esse projeto de iniciação científica contribuirá para a caracterização funcional do LMP-420, possibilitando estimar a porcentagem de inibição da transcrição do TNF-alfa em mioblastos de camundongos.