Estudo do papel diferencial dos dois genomas celulares, o mitocondrial e o nuclear, na morte celular causada por estresse oxidativo

• Processo: 08/06324-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2008
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Metabolismo e Bioenergética
• Pesquisador responsável: Nadja Cristhina de Souza Pinto
• Beneficiário: Jaqueline Lopes Pereira França
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Morte celular Azul de metileno DNA mitocondrial
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: azul de metileno | DNA mitocondrial | morte celular | rho0 | DNA mitocondrial

Resumo

O DNA mitocondrial (mtDNA) é altamente susceptível ao ataque por espécies reativas de oxigênio (EROs) por estar localizado próximo à cadeia transportadora de elétrons, onde a maioria desses EROs são geradas em células de mamíferos. Por outro lado, o DNA nuclear acumula lesões oxidativas em menores quantidades. O estresse oxidativo causa diversas lesões no DNA que podem ser mutagênicas, levando ao processo de transformação celular, ou citotóxico, levando à morte celular. A exposição de células de mamíferos a agentes oxidantes leva à morte celular. Entretanto, freqüentemente esses tratamentos lesionam os dois genomas celulares (DNA nuclear e DNA mitocondrial), e é, portanto, difícil de distinguir a contribuição de cada genoma para o processo de morte celular. Este projeto visa discriminar o papel de cada um dos dois genomas celulares para a morte celular causada por estresse oxidativo. Os experimentos utilizarão culturas de células de mamíferos (HeLa e HEK 293) expostas a dois compostos foto-reativos: azul de metileno, que, em baixas concentrações, causa a formação de lesões oxidativas apenas no mtDNA, e Ro-19-8022, que se distribui igualmente entre os dois compartimentos (núcleo e mitocôndria) e quando foto-ativado causa extensiva modificação oxidativa dos dois genomas. Desta forma, poderemos estabelecer se lesões oxidativas apenas no DNA mitocondrial diretamente causam morte celular. Em adição, nós utilizaremos células que não contém DNA mitocondrial (Á0) para identificar se lesões oxidativas em outros componentes celulares, como lipídeos e proteínas, são suficientes para desencadear o processo de morte celular.