Identificação de patógenos no sêmen bovino pela técnica de multiplex-PCR fluorescente

• Processo: 01/05486-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2001
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2005
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: José Fernando Garcia
• Beneficiário: Francisca Elda Ferreira Dias
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FOA). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araçatuba. Araçatuba , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bovino | Pcr | Semen

Resumo

Diversos relatos científicos indicam a possibilidade de que o sêmen infectado com agentes patogênicos possa disseminar doenças entre rebanhos pelo uso da inseminação artificial. Este projeto de pesquisa tem como objetivo o desenvolvimento da técnica de multiplex-PCR fluorescente para melhorar a eficiência do diagnóstico de Cámpylobacter fetus, Brucella abortus, Tritrichomonas fetus, Leptospira sp, Haemophilus somnus e Chlamydia sp. no sêmen bovino, num único teste. A determinação da concentração mínima dos patogenos no sêmen para que a técnica multiplex-PCR fluorescente seja eficiente será realizada pela diluição seriada dos microorganismos no sêmen obtidas de coleções de referência. O DNA das amostras contendo sêmen e microorganismo será purificado e avaliação da sensibilidade e especificidade será realizada usando oligonucleotídeos iniciadores específicos para cada patógeno, para amplificação por PCR. A reação de multiplex-PCR será realizada em um termociclador de temperatura programável e a visualização dos produtos amplificados será feita por eletroforese em gel de agarose 2% corado com brometo de etídeo e seqüencialmente em equipamento automático de análise de fragmentos de DNA. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

FRANCISCA ELDA FERREIRA DIAS; CÁRIS MARONE NUNES; TÂNIA VASCONCELOS CAVALCANTE; ANDRÉA AZEVEDO PIRES DE CASTRO; JORGE LUIS FERREIRA; JOSÉ FERNANDO GARCIA. PCR fluorescente associada à eletroforese capilar como ferramenta de diagnóstico de bactérias no semen. Ciênc. anim. bras., v. 14, n. 3, p. 366-372, 2013-09-00. (01/05486-1)

DIAS‚ F.E.F.; AOKI‚ S.M.; MESQUITA‚ L.G.; NUNES‚ C.M.; GARCIA‚ J.F.. Detecção de Leptospira pomona em sêmen bovino por eletroforese capilar fluorescente. Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, v. 43, n. 3, p. 394-399, 2006. (01/05486-1)