Mecanismos da regulação de expressão de genes de rDNA em Leishmania major e Leishmania mexicana

• Processo: 99/01948-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 1999
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2001
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Lucile Maria Floeter-Winter
• Beneficiário: Valeska de Andrade Stempliuk
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Fatores De Transcricao | Promotor | Rna Polimerase I | Transcricao | Transfeccao

Resumo

Ensaios de transfecção transiente mostraram que a região promotora da transcrição de rDNA de Leishmania amazonensis era reconhecida com maior eficiência por células heterólogas, como L. major. Regiões, delimitadas por oligonucletídeos apropriados, foram obtidas por PCR e clonadas em vetor apropriado. As construções resultantes foram utilizadas em experimentos de transfecção cujos resultados mostraram que: o domínio central do promotor é suficiente para promover a transcrição, sem apresentar a espécie-seletividade. O domínio à montante suprime a transcrição. As repetições de L. amazonensis estimulam a transcrição e são responsáveis pela espécie-seletividade. Para demonstrar que as regiões repetitivas são responsáveis pela estimulação e seletividade, iremos caracterizar essas regiões nas espécies L. major e L. mexicana, tanto pela determinação de seqüência como por teste funcional. Pretendemos determinar o padrão de ligação de fatores de transcrição às regiões do promotor envolvidas na transcrição por ensaios de "gel mobility shift". (AU)