Expressão, purificação e determinação da estrutura tridimensional de fragmentos da proteína antigênica B13 de (Tryponosoma cruzi) por espectroscopia de ressonância magnética nuclear

• Processo: 01/02279-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2001
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2002
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Arthur Gruber
• Beneficiário: Fernando Augusto de Abreu
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Trypanosoma cruzi Antígenos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antigeno B13 | Estrutura Tridimensional | Imunodeficiencia | Sintese Genica | Tryponosoma Cruzi

Resumo

A proteína B13 de Trypanosoma cruzi é um antígeno imunodominante, presente na superfície de formas tripomastigotas, que contém unidades repetitivas de 12 resíduos de aminoácidos. Foi descrito que peptídeos de 9 resíduos de aminoácidos contendo o epitopo FGQAAAGDK desta proteína assumem conformação helicoidal e são capazes de competir pela ligação de anticorpos anti-B13 com uma eficiência de 86%. Como a proteína B13 nativa apresenta um tamanho muito grande (140/116 kDa) e o gene inteiro não está clonado, um modelo relativamente mais próximo para estudar as conformações secundárias seria o uso de polipeptídeos contendo várias unidades repetitivas. Assim, visando testar a hipótese de que o elemento repetitivo na proteína nativa também possa estar na configuração de hélice, propõe-se neste projeto a determinação da estrutura tridimensional refinada a partir de fragmentos polipeptídicos contendo 4 e 8 repetições seriadas. Para isso, serão feitas construções recombinantes por síntese gênica e expressão em sistemas bacteriano e/ou de levedura. Os polipeptídeos expressos e purificados serão analisados pelas técnicas de dicroísmo circular (DC) e espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN) de alta resolução para descrever os seus detalhes estruturais. As informações obtidas poderão esclarecer, dentro deste modelo de estudo, a importância da conformação secundária destes epitopos para a ligação a anticorpos. (AU)