Investigação de mudanças conformacionais de bothropstoxina I (PLA2-Lys49) do veneno de Bothrops jararacussu em associação com membranas artificiais

• Processo: 02/12746-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2004
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Pesquisador responsável: Richard John Ward
• Beneficiário: Tatiana Lopes Ferreira
• Instituição Sede: Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Venenos de serpentes Bothrops Membranas artificiais Fluorescência Mutagênese sítio-dirigida Triptofano
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Danificacao De Membranas | Espectroscopia | Fluorescencia Intrinsica | Fosfolipase A2-Lys49 | Mutantes | Proteina Recombinante

Resumo

As fosfolipases A2 (PLA2) catalisam a hidrólise Ca2+-dependente de ligações ácido-éster na posição sn-2 dos fosfolipídeos, liberando ácidos graxos e lisofosfolipídeos como produto. A botropstoxina I (BthTx-I) é uma PLA2-Lys49 isolada do veneno de Bothrops jararacussu que apresenta uma substituição do aminoácido ácido aspártico por lisina na posição 49 do sítio ativo, impedindo a ligação do cofator Ca2+, com a conseqüente perda do ciclo catalítico produtivo. Embora sem atividade catalítica, a interação de BthTx-I com lipossomos provoca uma liberação rápida do conteúdo aquoso dos mesmos. BthTx-I existe como homodímero em solução no pH 7,0, e experimentos de cristalografia de raio-X demonstram variações entre as conformações, "aberta" e "fechada". É desconhecida a mudança nas conformações da proteína quando em associação com a membrana, mas sugere-se um possível mecanismo no qual uma transição entre estas conformações causa rompimento da bicamada lipídica, explicando, sua atividade Ca2+-independente. O cDNA da BthTx-I foi isolado, seqüenciado e a proteína foi expressa em E. coli e purificada. Utilizando-se a técnica de mutagênese sitio-dirigida pretende-se produzir proteínas recombinantes com triptofanos únicos em diferentes regiões da molécula. A fluorescência intrínseca dos triptofanos será utilizada para avaliar o modelo proposto através do estudo das mudanças conformacionais da proteína em solução bem como quando em associação com membranas artificiais. (AU)

Publicações científicas

(6)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ARAGAO, ELISANGELA APARECIDA; VIEIRA, DAVI SERRADELLA; CHIOATO, LUCIMARA; FERREIRA, TATIANA LOPES; LOURENZONI, MARCOS ROBERTO; SILVA, SAMUEL REGHIM; WARD, RICHARD JOHN. Characterization of suramin binding sites on the human group IIA secreted phospholipase A(2) by site-directed mutagenesis and molecular dynamics simulation. Archives of Biochemistry and Biophysics, v. 519, n. 1, p. 17-22, MAR 1 2012. (09/13902-7, 02/12746-2)

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FERREIRA, TATIANA LOPES; RULLER, ROBERTO; CHIOATO, LUCIMARA; WARD, RICHARD J.. Insights on calcium-independent phospholipid membrane damage by Lys49-PLA(2) using tryptophan scanning mutagenesis of bothropstoxin-I from Bothrops jararacussu. Biochimie, v. 90, n. 9, p. 1397-1406, SEP 2008. (01/00279-8, 02/12746-2, 01/08012-0)

CHIOATO, LUCIMARA; ARAGAO, ELISANGELA APARECIDA; FERREIRA, TATIANA LOPES; WARD, RICHARD J.. Active site mutants of human secreted Group IIA Phospholipase A(2) lacking hydrolytic activity retain their bactericidal effect. Biochimie, v. 94, n. 1, p. 132-136, JAN 2012. (01/00279-8, 02/12746-2)