Estudo estrutural de inibidores de serinoproteases extraídos de Triatoma infestans

• Processo: 01/08325-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2001
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2005
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Aparecida Sadae Tanaka
• Beneficiário: Ivan Torres Nicolau de Campos
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Phage display Triatoma Inibidores de serino proteinase
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Estrutura | Inibidores De Serinoproteases | Phage-Display | Triatoma Infestans

Resumo

Este projeto propõe a determinação das estruturas terciárias das infestinas recombinantes 1-4, 3-4 e 4 a fim de identificar regiões estratégicas nestas moléculas responsáveis pela interação com o fator XIIa. Para tal propomos a produção, purificação e estudo estrutural das mesmas utilizando métodos de cristalografia de proteínas. Através da análise da estrutura destes inibidores serão propostas regiões chaves da interação dos mesmos com o fator XIIa. Para confirmação da importância de tais regiões serão produzidas moléculas mutadas que serão avaliadas cineticamente. Para tal temos como objetivos: 1. Produzir, purificar e caracterizar as infestinas 1-4, 3-4 e 4, caso este último apresente atividade inibitória; 2. Produzir cristais para experimentos de difração; 3. Análise da estrutura dos cristais formados por difração de luz Sincrótron; 4. Clonagem, expressão e purificação de inibidores mutantes nas regiões de interação enzima-imbidor, 5. Caracterização cinética dos mutantes frente a enzimas proteolíticas. Paralelamente à produção de cristais, serão realizadas mutações na região do sítio reativo dos inibidores podendo ser utilizada técnicas como "phage-display", para a seleção de inibidores mais potentes e/ou seletivos. Estes inibidores serão avaliados cineticamente. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

CAMPOS, I. T. N.; SOUZA, T. A. C. B.; TORQUATO, R. J. S.; DE MARCO, R.; TANAKA-AZEVEDO, A. M.; TANAKA, A. S.; BARBOSA, J. A. R. G.. The Kazal-type inhibitors infestins 1 and 4 differ in specificity but are similar in three-dimensional structure. ACTA CRYSTALLOGRAPHICA SECTION D-BIOLOGICAL CRYSTALLOGRAPHY, v. 68, n. 6, p. 695-702, JUN 2012. (02/13960-8, 01/07535-0, 05/03514-9, 01/08325-9)

TANAKA-AZEVEDO, ANITA M.; TANAKA, APARECIDA S.; CAMPOS, IVAN TORRES NICOLAU DE. Identification and characterization of a novel factor XIIa inhibitor in the hematophagous insect, Triatoma infestans (Hemiptera: Reduviidae). FEBS Letters, v. 577, n. 3, p. 512-516, Nov. 2004. (02/13960-8, 01/08325-9)

CAMPOS, I. T. N.; SOUZA, T. A. C. B.; TORQUATO, R. J. S.; DE MARCO, R.; TANAKA-AZEVEDO, A. M.; TANAKA, A. S.; BARBOSA, J. A. R. G.. The Kazal-type inhibitors infestins 1 and 4 differ in specificity but are similar in three-dimensional structure. ACTA CRYSTALLOGRAPHICA SECTION D-STRUCTURAL BIOLOGY, v. 68, p. 8-pg., 2012-06-01. (05/03514-9, 02/13960-8, 01/08325-9, 01/07535-0)